prikaz prve stranice dokumenta Utjecaj funkcionalizacije tinjca s niklovim kloridom i poli-L-lizinom na vezivanje i vizualizaciju izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine ljudi mikroskopijom atomskih sila
  Download
PDF 1.3 MB
master's thesis
Utjecaj funkcionalizacije tinjca s niklovim kloridom i poli-L-lizinom na vezivanje i vizualizaciju izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine ljudi mikroskopijom atomskih sila
Rijeka: University of Rijeka, 2022. urn:nbn:hr:193:623861
Dević, Marta
University of Rijeka
Faculty of Biotechnology and Drug Development

Institutional repository: Repository of the University of Rijeka, Faculty of Biotechnology and Drug Development

Cite this document

Dević, M. (2022). Utjecaj funkcionalizacije tinjca s niklovim kloridom i poli-L-lizinom na vezivanje i vizualizaciju izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine ljudi mikroskopijom atomskih sila (Master's thesis). Rijeka: University of Rijeka. Retrieved from https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:623861

Dević, Marta. "Utjecaj funkcionalizacije tinjca s niklovim kloridom i poli-L-lizinom na vezivanje i vizualizaciju izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine ljudi mikroskopijom atomskih sila." Master's thesis, University of Rijeka, 2022. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:623861

Dević, Marta. "Utjecaj funkcionalizacije tinjca s niklovim kloridom i poli-L-lizinom na vezivanje i vizualizaciju izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine ljudi mikroskopijom atomskih sila." Master's thesis, University of Rijeka, 2022. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:623861

Dević, M. (2022). 'Utjecaj funkcionalizacije tinjca s niklovim kloridom i poli-L-lizinom na vezivanje i vizualizaciju izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine ljudi mikroskopijom atomskih sila', Master's thesis, University of Rijeka, accessed 17 November 2024, https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:623861

Dević M. Utjecaj funkcionalizacije tinjca s niklovim kloridom i poli-L-lizinom na vezivanje i vizualizaciju izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine ljudi mikroskopijom atomskih sila [Master's thesis]. Rijeka: University of Rijeka; 2022 [cited 2024 November 17] Available at: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:623861

M. Dević, "Utjecaj funkcionalizacije tinjca s niklovim kloridom i poli-L-lizinom na vezivanje i vizualizaciju izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine ljudi mikroskopijom atomskih sila", Master's thesis, University of Rijeka, Rijeka, 2022. Available at: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:623861

Metadata
TitleUtjecaj funkcionalizacije tinjca s niklovim kloridom i poli-L-lizinom na vezivanje i vizualizaciju izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine ljudi mikroskopijom atomskih sila
Title (english)Influence of mica functionalization with nickel chloride and poly-L-lysine on binding and visualization of extracellular vesicles from human cerebrospinal fluid by atomic force microscopyInfluence of mica functionalization with nickel chloride and poly-L-
AuthorMarta Dević
MentorMladenka Malenica (mentor)
MentorMarko Perčić (komentor)
Committee memberIvan Gudelj (predsjednik povjerenstva)
Committee memberMladenka Malenica (član povjerenstva)
Committee memberMarko Perčić (član povjerenstva)
Committee memberMarin Tota (član povjerenstva)
GranterUniversity of Rijeka
(Faculty of Biotechnology and Drug Development)
Rijeka
Defense date and country2022-07-01, Croatia
Scientific / art field,
discipline and subdiscipline		BIOTECHNICAL SCIENCES
Biotechnology
Abstract
Izvanstanične vezikule (IV) su membranske nanočestice koje sve stanice izlučuju i igraju važnu ulogu u komunikaciji između stanica, ali njihova nanometarska veličina zahtijeva napredne tehnike vizualizacije u cilju istraživanja njihove morfologije. Mikroskopija atomskih sila (engl. Atomic Force Microscopy) predložena je kao jedna od obećavajućih metoda za vizualizaciju, a upravo korištenjem načina tapkanja vršnom silom postignut je napredak u samoj tehnologiji snimanjem slika visoke razlučivosti. Tinjac se često koristi kao nosač uzorka zbog ravnine površine na razini atoma. Iako se uslijed elektrostatskih interakcija negativno nabijene IV vežu za tinjac, u cilju jačeg vezivanja potrebno je provesti funkcionalizaciju površine pozitivnim nabojem, primjerice niklovim(II) kloridom (NiCl2) ili poli-L-lizinom (PLL-om). Cilj ovog istraživanja bio je uspostaviti i optimizirati protokole vezivanja IV-a na tinjac prethodno funkcionaliziran s NiCl2 ili PLL-om te istražiti njihov učinak na vizualizaciju IV-a mikroskopom atomskih sila (AFM-om). Vizualizacija IV-a je izvedena AFM-om u načinu tapkanja, a tretman IV-a prije snimanja uključivao je; fiksaciju paraformaldehidom (PFA-om, 3%) i glutaraldehidom (GA-om, 1,5%), dehidraciju s etanolom ili 2,2-dimetoksipropanom i sušenje s heksametildisilazanom ili pri kritičnoj točki ugljikovog dioksida (CPD). Najbolji protokol za vizualizaciju IV-a i za primjenu u daljnjim istraživanjima uključuje funkcionalizaciju s NiCl2, fiksaciju s PFA-om/GA-om, dehidraciju s etanolom i CPD. Ova metoda se pokazala optimalnom jer jedina pokazuje ujednačen broj detektiranih čestica prema promjeru i visini te veću srednju vrijednost promjera i visine s većom standardnom devijacijom. Svaka korištena metoda identificirala je određene oblike IV-a; konkavne, konveksne, multirežnjaste i nepravilne. Budući da se ove metode primjenjuju kako bi se omogućila identifikacija po sferičnosti, promjeru i visini, još nije moguće razdvojiti IV od čestica iste veličine. S tim razlogom, sljedeći korak istraživanja trebala bi biti imuno-interakcija IV-a s antitijelima.
Abstract (english)
Extracellular vesicles (EV) are membrane nanoparticles that all cells secrete and play an important role in communication between cells, but their nanometer size requires advanced visualization techniques in order to investigate their morphology. Atomic force microscopy has been proposed as one of the promising methods for EV visualization, and due to the use of peak force tapping methods, advances have been made in the technology itself by capturing high-resolution images. Mica is often used as a sample carrier due to the plane surface at the atomic level. Although due to electrostatic interactions negatively charged EV binds to mica, in order to strengthen binding it is necessary to carry out surface functionalization with positive charges such as nickel(II) chloride (NiCl2) and poly-L-lysine (PLL). The aim of this study was to establish and optimize protocols of EV binding to mica previously functionalized with NiCl2 or PLL and to investigate their effect on EV visualization by atomic force microscope (AFM). EV visualization was performed on AFM in tapping mode, and pre-recording EV treatment included; fixation with paraformaldehyde (PFA, 3%) and glutaraldehyde (GA, 1,5%), dehydration with ethanol or 2,2-dimethoxypropane and drying with hexamethyldisilazane or at the critical point of carbon dioxide (CPD). The best protocol for EV visualization and for use in further research includes functionalization with NiCl2, fixation with PFA/GA, dehydration with ethanol, and CPD. This method proved to be optimal because it is the only one that shows a uniform number of detected particles according to diameter and height and a higher mean value of diameter and height with a higher standard deviation. Each method used identified certain forms of EV; concave, convex, multi-lobed and irregular. Because these methods are applied to allow identification by sphericity, diameter, and height, it is not yet possible to separate EV from particles of the same size. For this reason, the next step in research should be immuno-interaction of EV with antibodies.
Keywords
Keywords (english)
Languagecroatian
URN:NBNurn:nbn:hr:193:623861
Study programmeTitle: Medicinal chemistry
Study programme type: university
Study level: graduate
Academic / professional title: magistar/magistra medicinske kemije (magistar/magistra medicinske kemije)
Type of resourceText
File originBorn digital
Access conditionsOpen access
Embargo expiration date: 2024-07-01
Terms of useLicence In copyright icon
Created on2022-07-06 12:45:13