prikaz prve stranice dokumenta Imunohistokemijska karakterizacija protutijela za membranske proteine Na+/K+ATPazu, neurolin i prijenosnik organskih kationa 1 u cjelovitim uzorcima zebrice (Danio rerio)
  Download
PDF 2.02 MB
master's thesis
Imunohistokemijska karakterizacija protutijela za membranske proteine Na+/K+ATPazu, neurolin i prijenosnik organskih kationa 1 u cjelovitim uzorcima zebrice (Danio rerio)
Zagreb: University of Zagreb, Faculty of Science, 2022. urn:nbn:hr:217:327562
Lončarić, Nora
University of Zagreb
Faculty of Science
Department of Biology

Institutional repository: Repository of the Faculty of Science

Cite this document

Lončarić, N. (2022). Imunohistokemijska karakterizacija protutijela za membranske proteine Na+/K+ATPazu, neurolin i prijenosnik organskih kationa 1 u cjelovitim uzorcima zebrice (Danio rerio) (Master's thesis). Zagreb: University of Zagreb, Faculty of Science. Retrieved from https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:327562

Lončarić, Nora. "Imunohistokemijska karakterizacija protutijela za membranske proteine Na+/K+ATPazu, neurolin i prijenosnik organskih kationa 1 u cjelovitim uzorcima zebrice (Danio rerio)." Master's thesis, University of Zagreb, Faculty of Science, 2022. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:327562

Lončarić, Nora. "Imunohistokemijska karakterizacija protutijela za membranske proteine Na+/K+ATPazu, neurolin i prijenosnik organskih kationa 1 u cjelovitim uzorcima zebrice (Danio rerio)." Master's thesis, University of Zagreb, Faculty of Science, 2022. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:327562

Lončarić, N. (2022). 'Imunohistokemijska karakterizacija protutijela za membranske proteine Na+/K+ATPazu, neurolin i prijenosnik organskih kationa 1 u cjelovitim uzorcima zebrice (Danio rerio)', Master's thesis, University of Zagreb, Faculty of Science, accessed 04 November 2024, https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:327562

Lončarić N. Imunohistokemijska karakterizacija protutijela za membranske proteine Na+/K+ATPazu, neurolin i prijenosnik organskih kationa 1 u cjelovitim uzorcima zebrice (Danio rerio) [Master's thesis]. Zagreb: University of Zagreb, Faculty of Science; 2022 [cited 2024 November 04] Available at: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:327562

N. Lončarić, "Imunohistokemijska karakterizacija protutijela za membranske proteine Na+/K+ATPazu, neurolin i prijenosnik organskih kationa 1 u cjelovitim uzorcima zebrice (Danio rerio)", Master's thesis, University of Zagreb, Faculty of Science, Zagreb, 2022. Available at: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:327562

Metadata
TitleImunohistokemijska karakterizacija protutijela za membranske proteine Na+/K+ATPazu, neurolin i prijenosnik organskih kationa 1 u cjelovitim uzorcima zebrice (Danio rerio)
Title (english)Immunohistochemical characterization of Na+/K+ATP-ase, neurolin and organic cation membrane transporter 1 in zebrafish (Danio rerio) whole-mount samples
AuthorNora Lončarić
MentorDean Karaica (mentor)
MentorGoran Klobučar (komentor)
Committee memberGoran Klobučar (predsjednik povjerenstva)
Committee memberSandra Hudina (član povjerenstva)
Committee memberSven Jelaska (član povjerenstva)
Committee memberZoran Marčić (član povjerenstva)
GranterUniversity of Zagreb
Faculty of Science
(Department of Biology)
Zagreb
Defense date and country2022-09-26, Croatia
Scientific / art field,
discipline and subdiscipline		NATURAL SCIENCES
Biology
Abstract
U posljednjih nekoliko desetljeća uporaba zebrice (Danio rerio) u biomedicinskim i toksikološkim istraživanjima eksponencijalno raste. Brojne studije istražuju fiziološku/ekotoksikološku funkciju specifičnih proteina lokaliziranih u različitim tkivima zebrice. Za takva istraživanja najčešće se koristi metoda cjelokupnih preparata u kombinaciji s fluorescentnom mikroskopijom. Trenutno ne postoji jedinstveni pristup za provođenje imunohistokemijskih analiza na cjelovitim uzorcima embrija zebrica. U ovom radu upotrijebila sam embrije zebrice (120 sati nakon oplodnje) za određivanje ključnih uvjeta pri pripremi cjelovitih uzoraka embrija zebrice za imunohistokemijsku analizu pomoću antitijela za Na+ /K+¬ATPazu, ZN-8 i Oct1 membranske proteine. Dva fiksativa (4% paraformaldehid i Dents fiksativ) i tri različite temperature inkubacije (37 °C/30 min, 70 °C/15 min, 95 °C/5 min) testirani su kako bi se optimizirala imunohistokemijska metoda na cjelovitim uzorcima embrija zebrice. Rezultati su pokazali da upotreba različitih fiksativa i/ili obrade uzoraka pri određenoj temperaturi određuje optimalno vezanje protutijela. Fiksacija uzoraka Dentovim fiksativom je bila važna za detekciju proteina Na+ /K+ATPaze dok su fiksacija i inkubacija uzoraka pri određenoj temperaturi bili važni za detekciju proteina ZN-8. Suprotno od toga, dizajnirana protutijela za protein Oct1 zebrice nisu pokazala specifično vezanje u embrijima zebrica. Zaključno, ovaj rad predstavlja jednostavan i objedinjen pristup za imunohistokemijsku lokalizaciju različitih proteina u cjelovitim uzorcima zebrice.
Abstract (english)
In the last couple of decades, the use of zebrafish (Danio rerio) model in biomedical and toxicological research is exponentially increasing. Many studies investigate the physiological/ecotoxicological function of different proteins localized across different zebrafish tissues. Whole-mount preparations coupled with fluorescence microscopy are widely used for this task. To date there is no single approach for conducting whole-mount immunohistochemistry in zebrafish embryos. In this study we used zebrafish embryos (120 hours post fertilization) to determine key parameters in preparation of zebrafish embryos for the use in whole-mount immunohistochemistry by using four antibodies detecting Na+ /K+ - ATPase, ZN-8 and Oct1 membrane proteins. Two fixatives (4% paraformaldehyde and Dents fixative) and three different incubation temperatures (37 °C/30 min, 70 °C/15 min, 95 °C/5 min) were tested to optimize the whole-mount immunohistochemistry approach. Results showed that the use of different fixative and/or sample incubation temperature determines optimal antibody binding. Fixation with Dents fixative was essential for Na+ /K+ - ATPase detection whereas fixation and incubation temperature were important factors for ZN-8 protein detection. In contrast, designed anti-zebrafish Oct1 antibodies did not show specific binding in zebrafish embryos. Overall, this work presents a simple and unified approach for whole-mount immunohistochemistry localization of different proteins in zebrafish embryos.
Keywords
Keywords (english)
Languagecroatian
URN:NBNurn:nbn:hr:217:327562
Study programmeTitle: Ecology
Study programme type: university
Study level: graduate
Academic / professional title: magistar/magistra ekologije i zaštite prirode (magistar/magistra ekologije i zaštite prirode)
Type of resourceText
File originBorn digital
Access conditionsOpen access
Embargo expiration date: 2024-09-26
Terms of useLicence In copyright icon
Created on2022-10-26 11:28:44