prikaz prve stranice dokumenta Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293
Access restricted to students and staff of home institution
master's thesis
Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293
Rijeka: University of Rijeka, 2019. urn:nbn:hr:193:962872
Tomović, Eni
University of Rijeka
Faculty of Biotechnology and Drug Development

Institutional repository: Repository of the University of Rijeka, Faculty of Biotechnology and Drug Development

Cite this document

Tomović, E. (2019). Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293 (Master's thesis). Rijeka: University of Rijeka. Retrieved from https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:962872

Tomović, Eni. "Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293." Master's thesis, University of Rijeka, 2019. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:962872

Tomović, Eni. "Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293." Master's thesis, University of Rijeka, 2019. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:962872

Tomović, E. (2019). 'Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293', Master's thesis, University of Rijeka, accessed 23 December 2024, https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:962872

Tomović E. Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293 [Master's thesis]. Rijeka: University of Rijeka; 2019 [cited 2024 December 23] Available at: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:962872

E. Tomović, "Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293", Master's thesis, University of Rijeka, Rijeka, 2019. Available at: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:962872

Metadata
TitleKarakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293
Title (english)Characterization and cloning of SNX9 fused with green fluorescent protein in DAMI and HEK293 cell line
AuthorEni Tomović
MentorAntonija Jurak Begonja (mentor)
Committee memberJelena Ban (predsjednik povjerenstva)
Committee memberIvana Ratkaj (član povjerenstva)
Committee memberAntonija Jurak Begonja (član povjerenstva)
GranterUniversity of Rijeka
(Faculty of Biotechnology and Drug Development)
Rijeka
Defense date and country2019-09-19, Croatia
Scientific / art field,
discipline and subdiscipline		BIOTECHNICAL SCIENCES
Biotechnology
Abstract
Trombociti, najmanje krvne stanice koje imaju važnu ulogu u hemostazi, nastaju u koštanoj srži iz prekursora, megakarocita. U procesu nastanka trombocita reorganizacija aktinskog citoskeleta je esencijalna. Sortirajući neksin 9 (engl. Sorting nexin 9, SNX9) je višefunkcijski protein koji koordinira promet na membrani i dinamiku aktina unutar stanica. SNX9 aktivira proteine Wiskott-Aldrich sindroma (engl. Wiskott–Aldrich Syndrome protein, WASP) koji zauzvrat iniciraju polimerizaciju aktina putem Arp2/3 kompleksa. Arp2/3 kompleks se veže za aktinske filamente kako bi se započelo grananje F-aktinskih niti. Kako bi polimerizacija aktina bila potpuno uspješna potrebne su male Rho GTPaze te PI(3)P i PI(4,5)P2, važni signalni lipidi. Ovim radom ispitana je ekspresija i unutarstanična lokalizacija SNX9 u ljudskoj megakarioblastičnoj staničnoj liniji (DAMI). Naši glavni rezultati pokazali su kako je ekspresija SNX9 povećana u diferenciranim DAMI stanicama te kako SNX9 lokalizira ili perinuklearno ili je jednoliko raspršen po citoplazmi stanice. U diferenciranim DAMI stanicama SNX9 je često bio prisutan u obliku diskretnih vezikula koje su dijelom kolokalizirale s F-aktinom. Nadalje, kako bi dodatno ispitali lokalizaciju i učinak egzogene ekspresije SNX9, subklonirali smo SNX9 fuzioniran sa zelenim fluorescentnim proteinom (engl. green fluorescent protein, GFP) u retroviralni vektor (engl. Murine stem cell virus vector, MSCV). Točna veličina GFP-SNX9 i njegova lokalizacija je potvrđena u HEK293T staničnoj liniji. Ekspresija GFP-SNX9 u DAMI stanicama je pokazala podjednaku lokalizaciju kao endogeni SNX9. GFP-SNX9 je povećao polimerizaciju aktina (F-aktin) u nestimuliranim DAMI i HEK293T, ali ne i u diferenciranim DAMI stanicama. Dodatno, ekspresija GFP-SNX9 povisila je razinu PI(4,5)P2 u DAMI stanicama. Ovi rezultati ukazuju na to da bi SNX9 mogao biti uključen u proces polimerizacije aktina u DAMI stanicama te bi daljnja istraživanja mogla pomoći u definiranju uloge SNX9 u formiranju trombocita.
Abstract (english)
Platelets, the smallest blood cells that play a major role in hemostasis, develop within the bone marrow from precursor cells, megakaryocytes. In this process, extensive rearrangement of actin cytoskeleton is crucial for bending and branching of proplatelet extensions. Sorting nexin 9 (SNX9) is a multifunctional scaffold protein involved with coordination of membrane trafficking and actin dynamics. More specifically, SNX9 activates Wiskott-Aldrich Syndrome protein (WASP) which in return initiates actin polymerization via activation of the Arp2/3 complex. The Arp2/3 complex binds to actin filaments and starts the formation of branched F-actin fibers. In order for actin polymerization to be successful, small Rho GTPases and PI(3)P and PI(4,5)P2, important signaling lipids, must be involved. In this thesis, we investigated the expression and intracellular localization of SNX9 in human megakaryoblast cell line (DAMI). Our main results showed that expression of SNX9 increased with differentiation of DAMI cells and that SNX9 localized either perinuclearly or was dispersed throughout the cell cytoplasm. In differentiated DAMI cells SNX9 was often present in discrete vesicles that partially colocalized with F-actin. Moreover, in order to investigate localization and effect of exogenous SNX9, we subcloned SNX9 fused with green fluorescent protein (GFP) into retroviral murine stem cell virus vector (MSCV). Correct size of GFP-SNX9 and its localization were confirmed in HEK293T cell line. Expression of GFP-SNX9 showed same localization to endogenous protein in DAMI cells. Expression of GFP-SNX9 increased actin polymerization in HEK293T and undifferentiated DAMI, but not in differentiated DAMI cells. Furthermore, GFP-SNX9 increased PI(4,5)P2 levels in DAMI cells. These results suggest that SNX9 could be involved in the process of actin polymerization in DAMI cells. Therefore, a further study might help in better understanding of SNX9 role in platelet formation.
Keywords
Keywords (english)
Languagecroatian
URN:NBNurn:nbn:hr:193:962872
ProjectNumber: 2400
Title: Uloga fosfoinozitida u nastanku trombocita
Acronym: MkPI
Leader: Antonija Jurak Begonja
Jurisdiction: Croatia
Funder: HRZZ Uspostavni istraživački projekt
Study programmeTitle: Biotechnology in medicine
Study programme type: university
Study level: graduate
Academic / professional title: magistar/magistra biotehnologije u medicini (magistar/magistra biotehnologije u medicini)
Type of resourceText
File originBorn digital
Access conditionsAccess restricted to students and staff of home institution
Terms of useLicence In copyright icon
Created on2019-09-19 07:51:51