prikaz prve stranice dokumenta Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293
Pristup korisnicima matične ustanove
diplomski rad
Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293
Rijeka: Sveučilište u Rijeci, 2019. urn:nbn:hr:193:962872
Tomović, Eni
Sveučilište u Rijeci
Fakultet biotehnologije i razvoja lijekova

Institucijski repozitorij: Repozitorij Fakulteta biotehnologije i razvoja lijekova

Citirajte ovaj rad

Tomović, E. (2019). Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293 (Diplomski rad). Rijeka: Sveučilište u Rijeci. Preuzeto s https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:962872

Tomović, Eni. "Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293." Diplomski rad, Sveučilište u Rijeci, 2019. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:962872

Tomović, Eni. "Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293." Diplomski rad, Sveučilište u Rijeci, 2019. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:962872

Tomović, E. (2019). 'Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293', Diplomski rad, Sveučilište u Rijeci, citirano: 23.12.2024., https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:962872

Tomović E. Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293 [Diplomski rad]. Rijeka: Sveučilište u Rijeci; 2019 [pristupljeno 23.12.2024.] Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:962872

E. Tomović, "Karakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293", Diplomski rad, Sveučilište u Rijeci, Rijeka, 2019. Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:962872

Za citiranje koristite ovu mrežnu adresu: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:962872
Podaci o radu
NaslovKarakterizacija i kloniranje SNX9 fuzioniranog sa zelenim fluorescentnim proteinom u staničnoj liniji DAMI i HEK293
Naslov (engleski)Characterization and cloning of SNX9 fused with green fluorescent protein in DAMI and HEK293 cell line
AutorEni Tomović
MentorAntonija Jurak Begonja (mentor)
Član povjerenstvaJelena Ban (predsjednik povjerenstva)
Član povjerenstvaIvana Ratkaj (član povjerenstva)
Član povjerenstvaAntonija Jurak Begonja (član povjerenstva)
Ustanova koja je dodijelila
akademski / stručni stupanj		Sveučilište u Rijeci
(Fakultet biotehnologije i razvoja lijekova)
Rijeka
Datum i država obrane2019-09-19, Hrvatska
Znanstveno / umjetničko
područje, polje i grana		BIOTEHNIČKE ZNANOSTI
Biotehnologija
Sažetak
Trombociti, najmanje krvne stanice koje imaju važnu ulogu u hemostazi, nastaju u koštanoj srži iz prekursora, megakarocita. U procesu nastanka trombocita reorganizacija aktinskog citoskeleta je esencijalna. Sortirajući neksin 9 (engl. Sorting nexin 9, SNX9) je višefunkcijski protein koji koordinira promet na membrani i dinamiku aktina unutar stanica. SNX9 aktivira proteine Wiskott-Aldrich sindroma (engl. Wiskott–Aldrich Syndrome protein, WASP) koji zauzvrat iniciraju polimerizaciju aktina putem Arp2/3 kompleksa. Arp2/3 kompleks se veže za aktinske filamente kako bi se započelo grananje F-aktinskih niti. Kako bi polimerizacija aktina bila potpuno uspješna potrebne su male Rho GTPaze te PI(3)P i PI(4,5)P2, važni signalni lipidi. Ovim radom ispitana je ekspresija i unutarstanična lokalizacija SNX9 u ljudskoj megakarioblastičnoj staničnoj liniji (DAMI). Naši glavni rezultati pokazali su kako je ekspresija SNX9 povećana u diferenciranim DAMI stanicama te kako SNX9 lokalizira ili perinuklearno ili je jednoliko raspršen po citoplazmi stanice. U diferenciranim DAMI stanicama SNX9 je često bio prisutan u obliku diskretnih vezikula koje su dijelom kolokalizirale s F-aktinom. Nadalje, kako bi dodatno ispitali lokalizaciju i učinak egzogene ekspresije SNX9, subklonirali smo SNX9 fuzioniran sa zelenim fluorescentnim proteinom (engl. green fluorescent protein, GFP) u retroviralni vektor (engl. Murine stem cell virus vector, MSCV). Točna veličina GFP-SNX9 i njegova lokalizacija je potvrđena u HEK293T staničnoj liniji. Ekspresija GFP-SNX9 u DAMI stanicama je pokazala podjednaku lokalizaciju kao endogeni SNX9. GFP-SNX9 je povećao polimerizaciju aktina (F-aktin) u nestimuliranim DAMI i HEK293T, ali ne i u diferenciranim DAMI stanicama. Dodatno, ekspresija GFP-SNX9 povisila je razinu PI(4,5)P2 u DAMI stanicama. Ovi rezultati ukazuju na to da bi SNX9 mogao biti uključen u proces polimerizacije aktina u DAMI stanicama te bi daljnja istraživanja mogla pomoći u definiranju uloge SNX9 u formiranju trombocita.
Sažetak (engleski)
Platelets, the smallest blood cells that play a major role in hemostasis, develop within the bone marrow from precursor cells, megakaryocytes. In this process, extensive rearrangement of actin cytoskeleton is crucial for bending and branching of proplatelet extensions. Sorting nexin 9 (SNX9) is a multifunctional scaffold protein involved with coordination of membrane trafficking and actin dynamics. More specifically, SNX9 activates Wiskott-Aldrich Syndrome protein (WASP) which in return initiates actin polymerization via activation of the Arp2/3 complex. The Arp2/3 complex binds to actin filaments and starts the formation of branched F-actin fibers. In order for actin polymerization to be successful, small Rho GTPases and PI(3)P and PI(4,5)P2, important signaling lipids, must be involved. In this thesis, we investigated the expression and intracellular localization of SNX9 in human megakaryoblast cell line (DAMI). Our main results showed that expression of SNX9 increased with differentiation of DAMI cells and that SNX9 localized either perinuclearly or was dispersed throughout the cell cytoplasm. In differentiated DAMI cells SNX9 was often present in discrete vesicles that partially colocalized with F-actin. Moreover, in order to investigate localization and effect of exogenous SNX9, we subcloned SNX9 fused with green fluorescent protein (GFP) into retroviral murine stem cell virus vector (MSCV). Correct size of GFP-SNX9 and its localization were confirmed in HEK293T cell line. Expression of GFP-SNX9 showed same localization to endogenous protein in DAMI cells. Expression of GFP-SNX9 increased actin polymerization in HEK293T and undifferentiated DAMI, but not in differentiated DAMI cells. Furthermore, GFP-SNX9 increased PI(4,5)P2 levels in DAMI cells. These results suggest that SNX9 could be involved in the process of actin polymerization in DAMI cells. Therefore, a further study might help in better understanding of SNX9 role in platelet formation.
Ključne riječi
Ključne riječi (engleski)
Jezikhrvatski
URN:NBNurn:nbn:hr:193:962872
ProjektŠifra: 2400
Naziv: Uloga fosfoinozitida u nastanku trombocita
Kratica: MkPI
Voditelj: Antonija Jurak Begonja
Pravna nadležnost: Hrvatska
Financijer: HRZZ Uspostavni istraživački projekt
Studijski programNaziv: Biotehnologija u medicini
Vrsta studija: sveučilišni
Stupanj studija: diplomski
Akademski / stručni naziv: magistar/magistra biotehnologije u medicini (mag. biotech. in med.)
Vrsta resursaTekst
Način izrade datotekeIzvorno digitalna
Prava pristupaPristup korisnicima matične ustanove
Uvjeti korištenjaIkona licence Zaštićeno autorskim pravom.
Datum i vrijeme pohrane2019-09-19 07:51:51