prikaz prve stranice dokumenta Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena
  Download
PDF 1.4 MB
doctoral thesis
Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena
Split: University of Split, School of Medicine, 2020. urn:nbn:hr:171:705048
Rod, Eduard
University of Split
School of Medicine

Institutional repository: MEFST Repository

Cite this document

Rod, E. (2020). Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena (Doctoral thesis). Split: University of Split, School of Medicine. Retrieved from https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:171:705048

Rod, Eduard. "Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena." Doctoral thesis, University of Split, School of Medicine, 2020. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:171:705048

Rod, Eduard. "Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena." Doctoral thesis, University of Split, School of Medicine, 2020. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:171:705048

Rod, E. (2020). 'Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena', Doctoral thesis, University of Split, School of Medicine, accessed 29 November 2024, https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:171:705048

Rod E. Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena [Doctoral thesis]. Split: University of Split, School of Medicine; 2020 [cited 2024 November 29] Available at: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:171:705048

E. Rod, "Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena", Doctoral thesis, University of Split, School of Medicine, Split, 2020. Available at: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:171:705048

Metadata
TitleOptimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena
Title (english)Optimization of an ex vivo gene transfer to the hamstrings tendons muscle remnants : potential for genetic enhancement of bone healing
AuthorEduard Rod
MentorAlan Ivković (mentor)
Committee memberMirna Saraga-Babić (predsjednik povjerenstva)
Committee memberLovorka Grgurević (član povjerenstva)
Committee memberJanoš Terzić (član povjerenstva)
GranterUniversity of Split
School of Medicine
Split
Defense date and country2020, Croatia
Scientific / art field,
discipline and subdiscipline		BIOMEDICINE AND HEALTHCARE
Clinical Medical Sciences
Orthopedics
Universal decimal classification
(UDC)		616 - Pathology. Clinical medicine
Abstract
Uvod: Problem koštano-tetivnog cijeljenja nakon rekonstrukcije prednje ukrižene sveze učestao je i klinički značajan. Različite strategije, uključujuću gensku terapiju, korištene su u svrhu poboljšanja koštano-tetivnog cijeljenja. Ubrzana ex vivo genska terapija, iako uspješna, još uvijek prelazi prihvatljivo vrijeme u svrhu korištenja takve, tijekom rekonstrukcije prednje ukrižene sveze. Cilj: Cilj ovog istraživanja bio je ubrzati, tj. optimizirati in vitro transdukciju humanog mišićnog tkiva adenovirusnim vektorom koji nosi gen za kodiranje koštanog morfogenetskog proteina-2, dokazati da tako transducirano humano mišićno tkivo ima sposobnost osteogene diferencijacije te na taj način približiti metodu kliničkoj uporabi. Metode: U istraživanju je korišteno mišićno tkivo prikupljeno tijekom 35 artroskopskih rekonstrukcija prednjih ukriženih sveza. Istraživanje je podijeljeno na fazu optimizacije protokola ex vivo genske terapije i fazu potvrde osteogene diferencijacije mišićnog tkiva prema tako optimiziranom protokolu. U svrhu optimizacije protokola transdukcije korišteno je mišićno tkivo 30 pacijenata te adenovirusni vektor koji izražava gen za luciferazu (AdLuc). Određivan je optimalan broj adenovirusnih čestica za transdukciju mišićnog tkiva, optimalno vrijeme kontakta mišićnog tkiva i adenovirusnih čestica te utjecaja iona lantana i kalcija na poboljšanje transdukcije mišićnog tkiva. Pri uspostavljanju optimiziranog ex vivo genskog protokola, u svrhu potvrde osteogene diferencijacije, korišteni su mišićni uzorci 5 novih pacijenta te adenovirusni vektor koji izražava gen za koštani morfogenetski protein -2 (Ad.BMP2). Markeri osteogeneze transduciranih mišićnih uzoraka RUNX2, BSP i DMP-1 analizirani su kvantitativnom polimeraza lančanom reakcijom, otpuštenim BMP2 enzimskim imunotestom na čvrstoj fazi ELISA te prisustvom kolagena tip I (COL-I) u transduciranim mišićima imunihistokemijskim bojenjem. Rezultati: Mišićni uzorci transducirani prema optimiziranom protokolu ex vivo genske terapije, koristeći Ad.BMP2 iskazali su izraženu izraženost markera osteogeneze, visoku razinu otpuštanja BMP2 te jak izražaj za COL-I. Zaključak: Rezultati ove studije potvrđuju uspješnost osteogene diferencijacije ljudskih mišića nakon tridesetominutne in vitro transdukcije adenovirusnim vektorom Ad.BMP2 prema novom optimiziranom protokolu.
Abstract (english)
Introduction: The purpose of this study was to explore the hypothesis that adenoviral vector carrying the BMP2 gene is capable of transducing human tendon and muscle tissue harvested during ACL reconstruction and direct it towards osteogenic differentiation within the period shorter than one hour. Expedited ex vivo gene therapy is a novel and proved approach to tissue engineering. However, to be suitable for clinical application currently established protocols need optimization. Methods: Human samples from gracilis and semitendinosus muscle were harvested during ACL reconstruction from 35 patients. To optimize the transduction protocol, samples from 30 patients were transduced with Ad.Luc vector using different number of a plaque-forming unit (PFU/ml), different times of transduction and addition of positive ions for transduction enhancement. When the optimized protocol has been established, muscle samples from 5 patients were transduced with adenoviral vector Ad.BMP2, and analyzed by means of qRT-PCR, ELISA and Immunohistochemistry (IHC). Results: Samples transduced with adenoviral vector BMP2 according to the previously optimized protocol showed enhanced expression of all osteogenic markers, high BMP2 release and strong expression of Collagen type I (COL-I). Conclusion: Results of this proof of concept study suggest the possibility of successful in vitro transduction of human muscle tissue within 30 minutes and its differentiation towards osteogenic lineage.
Keywords
Keywords (english)
Languagecroatian
URN:NBNurn:nbn:hr:171:705048
Study programmeTitle: Translational Research in Biomedicine - TRIBE
Study programme type: university
Study level: postgraduate
Academic / professional title: doktor/doktorica znanosti, interdisciplinarna područja znanosti (doktor/doktorica znanosti, interdisciplinarna područja znanosti)
Type of resourceText
File originBorn digital
Access conditionsOpen access
Terms of useLicence In copyright icon
Created on2023-05-08 08:07:02