prikaz prve stranice dokumenta Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena
  Preuzmi
PDF 1.4 MB
disertacija
Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena
Split: Sveučilište u Splitu, Medicinski fakultet, 2020. urn:nbn:hr:171:705048
Rod, Eduard
Sveučilište u Splitu
Medicinski fakultet

Institucijski repozitorij: Repozitorij MEFST

Citirajte ovaj rad

Rod, E. (2020). Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena (Disertacija). Split: Sveučilište u Splitu, Medicinski fakultet. Preuzeto s https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:171:705048

Rod, Eduard. "Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena." Disertacija, Sveučilište u Splitu, Medicinski fakultet, 2020. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:171:705048

Rod, Eduard. "Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena." Disertacija, Sveučilište u Splitu, Medicinski fakultet, 2020. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:171:705048

Rod, E. (2020). 'Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena', Disertacija, Sveučilište u Splitu, Medicinski fakultet, citirano: 09.11.2024., https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:171:705048

Rod E. Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena [Disertacija]. Split: Sveučilište u Splitu, Medicinski fakultet; 2020 [pristupljeno 09.11.2024.] Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:171:705048

E. Rod, "Optimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena", Disertacija, Sveučilište u Splitu, Medicinski fakultet, Split, 2020. Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:171:705048

Za citiranje koristite ovu mrežnu adresu: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:171:705048
Podaci o radu
NaslovOptimizacija genske (ex vivo) terapije koštanim morfogenetskim proteinom-2 u rekonstrukciji prednje ukrižene sveze koljena
Naslov (engleski)Optimization of an ex vivo gene transfer to the hamstrings tendons muscle remnants : potential for genetic enhancement of bone healing
AutorEduard Rod
MentorAlan Ivković (mentor)
Član povjerenstvaMirna Saraga-Babić (predsjednik povjerenstva)
Član povjerenstvaLovorka Grgurević (član povjerenstva)
Član povjerenstvaJanoš Terzić (član povjerenstva)
Ustanova koja je dodijelila
akademski / stručni stupanj		Sveučilište u Splitu
Medicinski fakultet
Split
Datum i država obrane2020, Hrvatska
Znanstveno / umjetničko
područje, polje i grana		BIOMEDICINA I ZDRAVSTVO
Kliničke medicinske znanosti
Ortopedija
Univerzalna decimalna klasifikacija
(UDC)		616 - Patologija. Klinička medicina
Sažetak
Uvod: Problem koštano-tetivnog cijeljenja nakon rekonstrukcije prednje ukrižene sveze učestao je i klinički značajan. Različite strategije, uključujuću gensku terapiju, korištene su u svrhu poboljšanja koštano-tetivnog cijeljenja. Ubrzana ex vivo genska terapija, iako uspješna, još uvijek prelazi prihvatljivo vrijeme u svrhu korištenja takve, tijekom rekonstrukcije prednje ukrižene sveze. Cilj: Cilj ovog istraživanja bio je ubrzati, tj. optimizirati in vitro transdukciju humanog mišićnog tkiva adenovirusnim vektorom koji nosi gen za kodiranje koštanog morfogenetskog proteina-2, dokazati da tako transducirano humano mišićno tkivo ima sposobnost osteogene diferencijacije te na taj način približiti metodu kliničkoj uporabi. Metode: U istraživanju je korišteno mišićno tkivo prikupljeno tijekom 35 artroskopskih rekonstrukcija prednjih ukriženih sveza. Istraživanje je podijeljeno na fazu optimizacije protokola ex vivo genske terapije i fazu potvrde osteogene diferencijacije mišićnog tkiva prema tako optimiziranom protokolu. U svrhu optimizacije protokola transdukcije korišteno je mišićno tkivo 30 pacijenata te adenovirusni vektor koji izražava gen za luciferazu (AdLuc). Određivan je optimalan broj adenovirusnih čestica za transdukciju mišićnog tkiva, optimalno vrijeme kontakta mišićnog tkiva i adenovirusnih čestica te utjecaja iona lantana i kalcija na poboljšanje transdukcije mišićnog tkiva. Pri uspostavljanju optimiziranog ex vivo genskog protokola, u svrhu potvrde osteogene diferencijacije, korišteni su mišićni uzorci 5 novih pacijenta te adenovirusni vektor koji izražava gen za koštani morfogenetski protein -2 (Ad.BMP2). Markeri osteogeneze transduciranih mišićnih uzoraka RUNX2, BSP i DMP-1 analizirani su kvantitativnom polimeraza lančanom reakcijom, otpuštenim BMP2 enzimskim imunotestom na čvrstoj fazi ELISA te prisustvom kolagena tip I (COL-I) u transduciranim mišićima imunihistokemijskim bojenjem. Rezultati: Mišićni uzorci transducirani prema optimiziranom protokolu ex vivo genske terapije, koristeći Ad.BMP2 iskazali su izraženu izraženost markera osteogeneze, visoku razinu otpuštanja BMP2 te jak izražaj za COL-I. Zaključak: Rezultati ove studije potvrđuju uspješnost osteogene diferencijacije ljudskih mišića nakon tridesetominutne in vitro transdukcije adenovirusnim vektorom Ad.BMP2 prema novom optimiziranom protokolu.
Sažetak (engleski)
Introduction: The purpose of this study was to explore the hypothesis that adenoviral vector carrying the BMP2 gene is capable of transducing human tendon and muscle tissue harvested during ACL reconstruction and direct it towards osteogenic differentiation within the period shorter than one hour. Expedited ex vivo gene therapy is a novel and proved approach to tissue engineering. However, to be suitable for clinical application currently established protocols need optimization. Methods: Human samples from gracilis and semitendinosus muscle were harvested during ACL reconstruction from 35 patients. To optimize the transduction protocol, samples from 30 patients were transduced with Ad.Luc vector using different number of a plaque-forming unit (PFU/ml), different times of transduction and addition of positive ions for transduction enhancement. When the optimized protocol has been established, muscle samples from 5 patients were transduced with adenoviral vector Ad.BMP2, and analyzed by means of qRT-PCR, ELISA and Immunohistochemistry (IHC). Results: Samples transduced with adenoviral vector BMP2 according to the previously optimized protocol showed enhanced expression of all osteogenic markers, high BMP2 release and strong expression of Collagen type I (COL-I). Conclusion: Results of this proof of concept study suggest the possibility of successful in vitro transduction of human muscle tissue within 30 minutes and its differentiation towards osteogenic lineage.
Ključne riječi
Ključne riječi (engleski)
Jezikhrvatski
URN:NBNurn:nbn:hr:171:705048
Studijski programNaziv: Translacijska istraživanja u biomedicini
Vrsta studija: sveučilišni
Stupanj studija: poslijediplomski doktorski
Akademski / stručni naziv: doktor/doktorica znanosti, interdisciplinarna područja znanosti (dr. sc.)
Vrsta resursaTekst
Način izrade datotekeIzvorno digitalna
Prava pristupaOtvoreni pristup
Uvjeti korištenjaIkona licence Zaštićeno autorskim pravom.
Datum i vrijeme pohrane2023-05-08 08:07:02