Naslov Herpes simpleks virus 1 uzrokuje promjene ekspresije i unutarstanične lokalizacije proteina FoxO Naslov (engleski) Herpes simplex virus 1 induced increased expression and mislocalization of FOXO proteins Autor Ines Žarak Mentor Igor Jurak (mentor)Član povjerenstva Ivana Ratkaj (predsjednik povjerenstva)Član povjerenstva Antonija Jurak Begonja (član povjerenstva)Član povjerenstva Igor Jurak (član povjerenstva)Ustanova koja je dodijelila Sveučilište u Rijeci Datum i država obrane 2018-09-25, Hrvatska Znanstveno / umjetničko BIOTEHNIČKE ZNANOSTI Sažetak Životni ciklus herpes simpleks virusa 1 (HSV-1) sastoji se od dvije faze, produktivne i latentne. Tijekom produktivne faze virus uzrokuje brojne promjene u stanici, te podređuje staničnu mašineriju efikasnijoj replikaciji. HSV-1 se koristi različitim mehanizmima poput ICP0, koji usmjerava stanične proteine na degradaciju ili miRNA kojima regulira ekspresiju staničnih proteina, naročito onih uključenih u urođeni protuvirusni odgovor. Transkripcijski faktori FoxO važni su stanični proteini koji djeluju kao negativni regulatori protuvirusnog odgovora, što ih čini potencijalnom metom HSV-1. Istraživanje provedeno u Laboratoriju za molekularnu virologiju pokazalo je da tijekom HSV-1 produktivne infekcije dolazi do indukcije klastera staničnih miRNA molekula čije mete uključuju proteine iz podobitelji FoxO: FoxO1, FoxO3 i FoxO4, međutim utjecaj HSV-1 infekcije na ekspresiju proteina FoxO ostaje nedovoljno istražen. Naši preliminarni rezultati upućuju da u ranoj fazi produktivne HSV-1 infekcije dolazi do povećavanja razine proteina FoxO u stanicama HEK293. Kako bi istražili fenomen rane indukcije ekspresije, RPE1 i SH-SY5Y stanice inficirane su divljim tipom HSV-1, te je Western blot metodom određena razina proteina u različitim vremenskim točkama infekcije. Također, analizirali smo ekspresiju FoxO mRNA RT-qPCR metodom i unutarstaničnu lokalizaciju proteina FoxO vizualizacijom fluorescentnim mikroskopom u RPE1 stanicama. Naši rezultati pokazuju da HSV-1 produktivna infekcija dovodi do povećanja razine proteina FoxO1 i FoxO3, ali ne i mRNA, u ranoj fazi infekcije, te da rana indukcija ovisi o MOI. Također, tijekom kasnije faze HSV-1 infekcije FoxO1 translocira se iz jezgre inficiranih stanica u strukture cis Golgi mreže. Naši rezultati dokaz su da HSV-1 infekcija utječe na ekspresiju i lokalizaciju FoxO1 i FoxO3, te služe kao podloga za daljnje razjašnjavanje mehanizama regulacije, radi potencijalne uloge proteina FoxO u HSV-1 replikaciji.
Sažetak (engleski) Herpes simplex virus 1 (HSV-1) replicates in two phases, productive and latent phase. The productive HSV-1 infection causes many changes in the cell and subordinates cellular metabolism to efficient replication. HSV-1 is using various mechanisms, such as virus protein ICP0, which directes cellualr proteins for degradation, and miRNAs, which regulate expression of cellular proteins, particularly those involved in the innate antiviral response. FoxO transcription factors are important cellular proteins that act as negative antiviral response regulators, making them the potential target of HSV-1. A study in the Laboratory for Molecular Virology showed that HSV-1 productive infection induced cluster of cellular miRNAs targeting host genes FoxO1, FoxO3 and FoxO4, but the effect of HSV-1 infection on FoxO protein expression remains unknown. Our preliminary results indicate that at an early stage of productive HSV-1 infection FoxO protein levels rise in HEK293 cells. In order to investigate this early induction phenomenon we infected RPE1 and SH-SY5Y with HSV-1 at different time points of infection and analyzed proteins by Western blot. In addition we analyzed the expression of FoxO mRNA using PCR and the subcellular localization of FoxO protein by fluorescencence microscopy. Our results show that HSV-1 productive infection leads to increased FoxO1 and FoxO3 protein levels, but not mRNA levels, at early stage of infection, and that this early induction strongly depends on MOI. Also, during the later phase of HSV-1 infection FoxO1 protein translocates from nucleus of infected cells to structures appearing as cis-Golgi network. Our results demonstrate that HSV-1 infection affects the expression and localization of FoxO1 and FoxO3 proteins, and serve as a basis for further clarification of regulatory mechanisms, in order to determine potential role of FoxO proteins in HSV-1 replication.
Ključne riječi
HSV-1 produktivna infekcija
FoxO1
FoxO3
rana indukcija
Western blot
Ključne riječi (engleski)
HSV-1 productive infection
FoxO1
FoxO3
early induction
Western blot
Jezik hrvatski URN:NBN urn:nbn:hr:193:439084 Studijski program Naziv: Biotehnologija u medicini Vrsta resursa Tekst Način izrade datoteke Izvorno digitalna Prava pristupa Zatvoreni pristup Uvjeti korištenja Datum i vrijeme pohrane 2018-10-31 08:23:45
