Naslov Analiza izražaja IMP3 i podoplanina u karcinoma želuca dvostrukom imunofluorescentnom metodom
Naslov (engleski) ANALYSIS OF IMP3 AND PODOPLANIN EXPRESSION IN GASTRIC CANCER BY DOUBLE IMMUNOFLUORESCENT METHOD
Autor Antonela Matijaš Hrgović
Mentor Merica Glavina Durdov (mentor)
Član povjerenstva Daniela Šupe-Domić (predsjednik povjerenstva)
Član povjerenstva Sendi Kuret (član povjerenstva)
Član povjerenstva Merica Glavina Durdov (član povjerenstva)
Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj Sveučilište u Splitu (Sveučilišni odjel zdravstvenih studija) (Katedra za medicinsko laboratorijsku dijagnostiku) Split
Datum i država obrane 2022-07-28, Hrvatska
Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana BIOMEDICINA I ZDRAVSTVO Kliničke medicinske znanosti Patologija
Sažetak Cilj rada: u histološkim preparatima adenokarcinoma želuca ispitati izražaj IMP3 i podoplanina metodom indirektne dvostruke imunofluorescencije.
Materijali i metode: Parafinski blokovi tumorskog tkiva 26 ispitanika s adenokarcinomom želuca operiranih od 2014. do 2018,. u KBC Split prikupljeni su iz arhive Kliničkog zavoda za patologiju, sudsku medicinu i citologiju (dalje Zavoda). Demografski podaci prikupljeni su iz zavodske pismohrane, a podatak o smrti iz knjige mrtvozorstva. Istraživanje je provedeno u laboratoriju Katedre za patologiju MF u Splitu i imunohistokemijskom labratoriju Zavoda. U predanalitičkom postupku su iz parafinskih blokova izrezani preparati debljine 4 µm, deparafinirani, rehidrirani i obojeni I) rutinski hemalaun-eozin radi histološke analize, II) imunohistokemijski na stroju Ventana Ultrabenchmark radi kontrole istraživane metode i III) ručno metodom dvostruke indirektne imunofluorescence. Rezultati bojenje prve dvije metode analizirani su na svjetlosnom mikroskopu. U postupku imunofluorescentnog bojenja je nakon otvaranja antigena kuhanjem u citratnom puferu apliciran koktel monoklonalnog kunićjeg protutijela na IMP3 i monoklonalnog mišjeg protutijela na podoplanin, te preparati inkubirani 1h u tamnom i vlažnom prostoru. Potom su isprani u PBS-u i apliciran koktel sekundarnih protutijela specifičnih za vrstu i obilježenih različitim fluorescentnim bojama, te inkubirani 1 h. Nakon ispiranja u PBS-u aplicirana je boja DAPI 5 minuta, preparati isprani u PBS i pokriveni Immunomontom i pokrovnicom. Mikroskopska analiza urađena je na fluorescentnom mikroskopu Olympus uporabom kamere i programa Cell Sens.
Rezultati: Dokazano je prisustvo IMP3 kao granuliranog crvenog signala u citoplazmi dijela tumorskih stanica i podoplanina kao finogranuliranog zelenog signala u endotelu limfnih žila.
Sažetak (engleski) The aim of the study: to analyze the expression of IMP3 and podoplanin in histological slides of gastric adenocarcinoma using the method of indirect double immunofluorescence.
Materials and methods: Paraffin blocks of tumor tissue of 26 patients with gastric adenocarcinoma who underwent total gastrectomy from 2014 to 2018 at University Hospital Split were collected from the archives of the Clinical Institute for Pathology, Forensic Medicine and Cytology (hereinafter the Institute). Demographic characteristics were collected from the institution's archives, and data on the deceased from the coroner's evidence. The research was conducted in the laboratory of the Department of Pathology of the Medical School and the Institute's immunohistochemistry laboratory. In the pre-analytical procedure, 4 µm slides were cut from paraffin blocks, deparaffinized, rehydrated and stained I) with hemalaun-eosin for histological analysis, II) immunohistochemically on the Ventana Ultrabenchmark machine to control the tested method and III) manually using the method of double indirect immunofluorescence. The staining results of the first two methods were analyzed under a light microscope. In the immunofluorescent staining procedure, after antigen ritrieval cooking in citrate buffer, a cocktail of monoclonal rabbit antibody to IMP3 and monoclonal mouse antibody to podoplanin was applied, and incubated for 1 hour in a dark and humid chamber. The slides were then washed in PBS and a cocktail of species-specific secondary antibodies labeled with different fluorescent dyes was applied and incubated for 1 h. After washing in PBS, DAPI stain was applied for 5 minutes, slides washed in PBS and covered with Immunomont and a coverslip. Microscopic analysis was performed on the Olympus fluorescence microscope using a camera and the Cell Sens program.
Results: The presence of IMP3 as a granular red signal in the cytoplasm of some tumor cells and podoplanin as a finely granular green signal in the endothelium of lymphatic vessels was demonstrated.
Ključne riječi
IMP3
podoplanin
adenokarcinom želuca
tumorski onkoproteini
Ključne riječi (engleski)
IMP3
podoplanin
gastric cancer
oncoproteins
Jezik hrvatski
URN:NBN urn:nbn:hr:176:571348
Studijski program Naziv: Medicinska laboratorijska dijagnostika Vrsta studija: sveučilišni Stupanj studija: preddiplomski Akademski / stručni naziv: sveučilišni prvostupnik/ prvostupnica (baccalaureus/ baccalaurea) medicinske laboratorijske dijagnostike (univ.bacc.med.lab.diag.)
Vrsta resursa Tekst
Način izrade datoteke Izvorno digitalna
Prava pristupa Pristup korisnicima matične ustanove
Uvjeti korištenja
Datum i vrijeme pohrane 2022-07-29 11:00:28