prikaz prve stranice dokumenta Ekspresija i karakterizacija rekombinantnoga folikul-stimulirajućega hormona (FSH) u CHO staničnoj liniji u mediju bez seruma
Pristup korisnicima matične ustanove
disertacija
Ekspresija i karakterizacija rekombinantnoga folikul-stimulirajućega hormona (FSH) u CHO staničnoj liniji u mediju bez seruma
Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, 2012. urn:nbn:hr:159:761874
Antolović, Željka
Sveučilište u Zagrebu
Prehrambeno-biotehnološki fakultet

Institucijski repozitorij: Repozitorij Prehrambeno-biotehnološkog fakulteta u Zagrebu

Citirajte ovaj rad

Antolović, Ž. (2012). Ekspresija i karakterizacija rekombinantnoga folikul-stimulirajućega hormona (FSH) u CHO staničnoj liniji u mediju bez seruma (Disertacija). Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet. Preuzeto s https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:761874

Antolović, Željka. "Ekspresija i karakterizacija rekombinantnoga folikul-stimulirajućega hormona (FSH) u CHO staničnoj liniji u mediju bez seruma." Disertacija, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, 2012. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:761874

Antolović, Željka. "Ekspresija i karakterizacija rekombinantnoga folikul-stimulirajućega hormona (FSH) u CHO staničnoj liniji u mediju bez seruma." Disertacija, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, 2012. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:761874

Antolović, Ž. (2012). 'Ekspresija i karakterizacija rekombinantnoga folikul-stimulirajućega hormona (FSH) u CHO staničnoj liniji u mediju bez seruma', Disertacija, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, citirano: 20.12.2024., https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:761874

Antolović Ž. Ekspresija i karakterizacija rekombinantnoga folikul-stimulirajućega hormona (FSH) u CHO staničnoj liniji u mediju bez seruma [Disertacija]. Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet; 2012 [pristupljeno 20.12.2024.] Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:761874

Ž. Antolović, "Ekspresija i karakterizacija rekombinantnoga folikul-stimulirajućega hormona (FSH) u CHO staničnoj liniji u mediju bez seruma", Disertacija, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, Zagreb, 2012. Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:761874

Za citiranje koristite ovu mrežnu adresu: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:761874
Podaci o radu
NaslovEkspresija i karakterizacija rekombinantnoga folikul-stimulirajućega hormona (FSH) u CHO staničnoj liniji u mediju bez seruma
Naslov (engleski)Expression and characterization of recombinant follicle-stimulating hormone (FSH) in CHO cell line in serum-free medium
AutorŽeljka Antolović
MBZ: 193234
MentorVladimir Mrša (mentor)
Član povjerenstvaVišnja Gaurina-Srček (predsjednik povjerenstva)
Ustanova koja je dodijelila
akademski / stručni stupanj		Sveučilište u Zagrebu
Prehrambeno-biotehnološki fakultet
Zagreb
Datum i država obrane2012-09-19, Hrvatska
Znanstveno / umjetničko
područje, polje i grana		BIOTEHNIČKE ZNANOSTI
Biotehnologija
Univerzalna decimalna klasifikacija
(UDC)		577 - Biokemija. Molekularna biologija. Biofizika
Sažetak
FSH, član porodice gonadotropnih peptidnih hormona, nastaje u adenohipofizi i ima ključnu ulogu u reprodukciji sisavaca. Humani FSH se danas proizvodi rekombinantnom DNA tehnologijom u kulturi animalnih stanica. Zbog niza problema i rizika vezanih za korištenje seruma u mediju, za biotehnološku proizvodnju terapijskih proteina poželjno je koristiti medij bez seruma odnosno kemijski definirani medij. U ovom radu stanice CHO DG44, koje rastu u suspenziji i kemijski definiranom mediju, transfektirane su zasebnim ekspresijskim vektorima od kojih svaki sadržava gen za jednu od podjedinica humanog FSH. Tijekom uzgoja u selektivnom mediju s metotreksatom i nakon nekoliko ciklusa umnožavanja FSHα i FSHβ gena, dobivene su stanice koje proizvode heterodimer rFSH. Metodom graničnog razrijeđivanja stanica izdvojeni su pojedinačni klonovi. Napravljen je probir klonova s obzirom na ekspresiju rFSH. Odabrani klonovi uzgajani su u suspenziji u kemijski definiranom mediju, a tijekom procesa uzgoja u različitim kultivacijskim sustavima laboratorijskog mjerila praćen je udio živih stanica i specifična brzina rasta, kinetika potrošnje nutritijenata i nastajanja metabolita te proizvodnja eksprimiranog rFSH. Optimiranjem uzgoja dodatkom kemijski definiranih hranjivih smjesa u medij četiri puta je povećan prinos rFSH u odnosu na uzgoj u početnim uvjetima. Dokazano je da se rFSH izlučuje u medij kao cjeloviti heterodimer čiji glikozilacijski profil odgovara referentnom rFSH.
Sažetak (engleski)
FSH, a member of gonadotropin family of peptide hormones, is secreted by the anterior pituitary gland and has a key role in reproduction. FSH can be produced in animal cell expression systems by recombinant DNA technology. In biopharmaceutical production of therapeutic proteins it is preferred to use growth medium without serum. In this work, CHO DG44 cells were cultivated in a chemically-defined medium in suspension and transfected by two separate expression vectors containing FSHα and FSHβ genes to achieve stable expression of recombinant human FSH. After gene amplification process and cloning, the clones producing rFSH were selected. The production of rFSH was increased 4 times by optimization of cell growth in suspension and various cultivation systems. Analysis of metabolites present in media led to define the best ratio among the used chemically-defined feedings. Additionally, their influence on cell growth in suspension and production of rFSH was determined. The rFSH was purified by immuno-affinity chromatography. It was confirmed that the rFSH heterodimer, expressed in CHO DG44 cells and secreted into medium, had the glycosylation pattern of isoformes corresponding to that of the rFSH reference product.
Ključne riječi
Ključne riječi (engleski)
Jezikhrvatski
URN:NBNurn:nbn:hr:159:761874
Datum promocije2012-10-21
Studijski programNaziv: Biotehnologija i bioprocesno inženjerstvo
Vrsta studija: sveučilišni
Stupanj studija: poslijediplomski doktorski
Akademski / stručni naziv: doktor/doktorica znanosti (dr.sc.)
Vrsta resursaTekst
Način izrade datotekeIzvorno digitalna
Prava pristupaPristup korisnicima matične ustanove
Uvjeti korištenjaIkona licence Zaštićeno autorskim pravom.
Datum i vrijeme pohrane2018-05-16 11:50:14