prikaz prve stranice dokumenta Konstrukcija plazmida koji omogućuje pojačanu ekspresiju konstitutivno aktivnog alela YAP1C620F
  Preuzmi
PDF 1.24 MB
završni rad
Konstrukcija plazmida koji omogućuje pojačanu ekspresiju konstitutivno aktivnog alela YAP1C620F
Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, 2019. urn:nbn:hr:159:714419
Ćurković, Lada
Sveučilište u Zagrebu
Prehrambeno-biotehnološki fakultet
Zavod za biokemijsko inženjerstvo
Laboratorij za biologiju i genetiku mikroorganizama

Institucijski repozitorij: Repozitorij Prehrambeno-biotehnološkog fakulteta u Zagrebu

Citirajte ovaj rad

Ćurković, L. (2019). Konstrukcija plazmida koji omogućuje pojačanu ekspresiju konstitutivno aktivnog alela YAP1C620F (Završni rad). Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet. Preuzeto s https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:714419

Ćurković, Lada. "Konstrukcija plazmida koji omogućuje pojačanu ekspresiju konstitutivno aktivnog alela YAP1C620F." Završni rad, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, 2019. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:714419

Ćurković, Lada. "Konstrukcija plazmida koji omogućuje pojačanu ekspresiju konstitutivno aktivnog alela YAP1C620F." Završni rad, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, 2019. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:714419

Ćurković, L. (2019). 'Konstrukcija plazmida koji omogućuje pojačanu ekspresiju konstitutivno aktivnog alela YAP1C620F', Završni rad, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, citirano: 16.11.2024., https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:714419

Ćurković L. Konstrukcija plazmida koji omogućuje pojačanu ekspresiju konstitutivno aktivnog alela YAP1C620F [Završni rad]. Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet; 2019 [pristupljeno 16.11.2024.] Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:714419

L. Ćurković, "Konstrukcija plazmida koji omogućuje pojačanu ekspresiju konstitutivno aktivnog alela YAP1C620F", Završni rad, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, Zagreb, 2019. Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:714419

Za citiranje koristite ovu mrežnu adresu: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:714419
Podaci o radu
NaslovKonstrukcija plazmida koji omogućuje pojačanu ekspresiju konstitutivno aktivnog alela YAP1C620F
Naslov (engleski)Construction of the overexpression plasmid carrying constitutively active YAP1C620F allele
AutorLada Ćurković
MentorAnamarija Štafa (mentor)
Ustanova koja je dodijelila
akademski / stručni stupanj		Sveučilište u Zagrebu
Prehrambeno-biotehnološki fakultet
(Zavod za biokemijsko inženjerstvo)
(Laboratorij za biologiju i genetiku mikroorganizama)
Zagreb
Datum i država obrane2019-09-09, Hrvatska
Znanstveno / umjetničko
područje, polje i grana		BIOTEHNIČKE ZNANOSTI
Biotehnologija
Sažetak
Zbog složene kemijske strukture, kvasac ne može fermentirati lignocelulozne sirovine te ih je potrebno hidrolizirati, no pri hidrolizi se uz fermentabilne šećere oslobađaju i inhibitori rasta (slabe kiseline i derivati furana). Cilj ovog rada bio je uvesti točkastu mutaciju C620F u gen YAP1 čijom translacijom nastaje konstitutivno aktivan oblik transkripcijskog faktora Yap1 koji uzrokuje povećanu otpornost stanica kvasca na visoke koncentracije furfurala i hidroksimetilfurfurala. Mutacija je uvedena u gen YAP1 na plazmidu pSP-YAP1 u dva koraka. Tijekom lančane reakcije polimerazom sintetizirana je linearna plazmidna DNA koja sadrži točkastu mutaciju u genu YAP1. Linearni produkt je potom tretiran smjesom enzima KLD koja se sastoji od kinaze, ligaze i DpnI te je transformirana bakterija E. coli elektroporacijom. Iz transformiranih bakterijskih stanica izolirana je plazmidna DNA te je restrikcijskom analizom i sekvenciranjem potvrđeno uspješno uvođenje točkaste mutacije i konstrukcija plazmida pSP-YAP1C620F.
Sažetak (engleski)
Due to their complex chemical structure yeasts cannot directly ferment lignocellulosic materials. Therefore, the lignocellulosis materials need to be hydrolysed releasing fermentable sugars and growth inhibitors (weak acids and furan derivatives). The aim of this research was to introduce a point mutation C620F in the YAP1 gene creating constitutively active transcription factor Yap1C620F that increases resistance of yeasts to high concetrations of furfural and hydroxymethylfurfural. This point mutation was introduced in the YAP1 gene on pSP-YAP1 plasmid in two steps. A linear plasmid DNA, with YAP1C620F allele, was synthesized in polymerase chain reaction. The PCR product was then treated with KLD mix, an enzyme mixture containing kinase, ligase and DpnI and then E. coli was transformed by electroporation. Plasmid DNA was isolated from transformants and the introduction of point mutation and construction of the pSP-YAP1C620F plasmid were confirmed by restriction analysis and Sanger sequencing.
Ključne riječi
Ključne riječi (engleski)
Jezikhrvatski
URN:NBNurn:nbn:hr:159:714419
Studijski programNaziv: Biotehnologija
Vrsta studija: sveučilišni
Stupanj studija: preddiplomski
Akademski / stručni naziv: sveučilišni/a prvostupnik/prvostupnica (baccalaureus/baccalaurea) inženjer/inženjerka biotehnologije (univ. bacc. ing. biotechn)
Vrsta resursaTekst
Način izrade datotekeIzvorno digitalna
Prava pristupaOtvoreni pristup
Uvjeti korištenjaIkona licence Zaštićeno autorskim pravom.
Datum i vrijeme pohrane2019-09-10 11:38:25