prikaz prve stranice dokumenta Pozitivan učinak C-terminalnog rigidnog linkera na imobilizaciju saharoze fosforilaze
  Preuzmi
PDF 2.2 MB
diplomski rad
Pozitivan učinak C-terminalnog rigidnog linkera na imobilizaciju saharoze fosforilaze
Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, 2022. urn:nbn:hr:159:812823
Mikac, Ivan
Sveučilište u Zagrebu
Prehrambeno-biotehnološki fakultet
Zavod za biokemijsko inženjerstvo
Laboratorij za biokemijsko inženjerstvo, industrijsku mikrobiologiju i tehnologiju piva i slada

Institucijski repozitorij: Repozitorij Prehrambeno-biotehnološkog fakulteta u Zagrebu

Citirajte ovaj rad

Mikac, I. (2022). Pozitivan učinak C-terminalnog rigidnog linkera na imobilizaciju saharoze fosforilaze (Diplomski rad). Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet. Preuzeto s https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:812823

Mikac, Ivan. "Pozitivan učinak C-terminalnog rigidnog linkera na imobilizaciju saharoze fosforilaze." Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, 2022. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:812823

Mikac, Ivan. "Pozitivan učinak C-terminalnog rigidnog linkera na imobilizaciju saharoze fosforilaze." Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, 2022. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:812823

Mikac, I. (2022). 'Pozitivan učinak C-terminalnog rigidnog linkera na imobilizaciju saharoze fosforilaze', Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, citirano: 27.12.2024., https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:812823

Mikac I. Pozitivan učinak C-terminalnog rigidnog linkera na imobilizaciju saharoze fosforilaze [Diplomski rad]. Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet; 2022 [pristupljeno 27.12.2024.] Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:812823

I. Mikac, "Pozitivan učinak C-terminalnog rigidnog linkera na imobilizaciju saharoze fosforilaze", Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, Zagreb, 2022. Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:812823

Za citiranje koristite ovu mrežnu adresu: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:812823
Podaci o radu
NaslovPozitivan učinak C-terminalnog rigidnog linkera na imobilizaciju saharoze fosforilaze
Naslov (engleski)Positive effect of C-terminal rigid linker on immobilization of a sucrose phosphorylase
AutorIvan Mikac
MentorAnita Slavica (mentor)
Član povjerenstvaRenata Teparić (predsjednik povjerenstva)
Član povjerenstvaBlaženka Kos (član povjerenstva)
Ustanova koja je dodijelila
akademski / stručni stupanj		Sveučilište u Zagrebu
Prehrambeno-biotehnološki fakultet
(Zavod za biokemijsko inženjerstvo)
(Laboratorij za biokemijsko inženjerstvo, industrijsku mikrobiologiju i tehnologiju piva i slada)
Zagreb
Datum i država obrane2022-09-30, Hrvatska
Znanstveno / umjetničko
područje, polje i grana		BIOTEHNIČKE ZNANOSTI
Biotehnologija
Sažetak
Gene coding for sucrose phosphorylase (SP) from Leuconostoc mesenteroides (Lm) was inserted into pET21b with N- (N, His6-LmSP) or C-terminal (C) His₆-tag (LmSP-His₆) and rigid linker (L) consisted of repetitive sequences of (EAAAK)n with n = 6 (~5 nm) and 14 (~10 nm) or n = 6 (~5 nm), 14 (~10 nm) and 19 (~15 nm), respectively. Fused genes and the plasmid were used for electroporation of E. coli (BL21)DE3 and constructs were expressed, isolated, and purified by affinity chromatography. Since inclusion bodies were observed with N-terminally fused linkers, only Cterminally His6-tagged constructs with higher specific activity were considered for immobilization experiments. The immobilization of the control and LmSP-CL₅nm on SEPABEADSTM EC-EP was successful without any unbound protein in the supernatant. Due to its size, the rigid linker of LmSPCL₅nm completely prevented Cu²⁺(SEPABEADSTM EC-EP) and His₆ (the construct) coupling. The control and three LmSP-CL constructs were readily bound to Ni-NTA Superflow and had a higher immobilization yield than the control, with the highest immobilization efficiency of LmSP-CL₁₅nm.
Sažetak (hrvatski)
Gen koji kodira saharozu fosforilazu (SF) iz Leuconostoc mesenteroides (Lm) je insertiran u pET21b sa N- (N, His₆-LmSF) ili C-terminalnim (C) His₆-tag-om (LmSF-His6) i rigidnim linkerom (L), koji je načinjen od ponavljajućih sekvenci (EAAAK)n, gdje je, redom, n = 6 (~5 nm) i 14 (~10 nm) ili n = 6 (~5 nm), 14 (~10 nm) i 19 (~15 nm). Geni fuzirani u plazmid korišteni su za elektroporaciju E. coli (BL21)DE3 i ovi konstrukti su eksprimirani, izolirani i pročišćeni afinitetnom kromatografijom. Inkluzijska tijela su formirana kod linkera na N-kraju proteina, pa su samo konstrukti sa His₆-tag-om na C-kraju proteina sa višom specifičnom aktivnosti korišteni u eksperimentima imobilizacije. Imobilizacija kontrole i LmSP-CL₅nm na nosaču SEPABEADSTM EC-EP bila je uspješna, te nevezani proteini nisu detektirani u supernatantu. Zbog svoje veličine, rigidni linker u LmSP-CL₁₅nm potpuno je spriječio povezivanje Cu²⁺(SEPABEADSTM EC-EP) i His₆ (s konstrukta). Kontrola i tri konstrukta LmSP-CL direktno su se vezali na Ni-NTA Superflow i, u usporedbi s kontrolom, uspješnija je bila imobilizacija ovih konstrukata, a najveća imobilizacijska učinkovitost je procijenjena kod LmSP-CL₁₅nm.
Ključne riječi
Ključne riječi (engleski)
Jezikengleski
URN:NBNurn:nbn:hr:159:812823
Studijski programNaziv: Molekularna biotehnologija
Vrsta studija: sveučilišni
Stupanj studija: diplomski
Akademski / stručni naziv: magistar/magistra inženjer/inženjerka molekularne biotehnologije (mag. ing. biotechn.)
Vrsta resursaTekst
Način izrade datotekeIzvorno digitalna
Prava pristupaOtvoreni pristup
Uvjeti korištenjaIkona licence Imenovanje-Bez prerada 4.0 međunarodna (CC BY-ND 4.0)
Datum i vrijeme pohrane2023-02-27 12:44:47