prikaz prve stranice dokumenta Semi-rational engineering of Adh2 protein for better methanol utilization in yeast Komagataella phaffii
  Preuzmi
PDF 2.99 MB
diplomski rad
Semi-rational engineering of Adh2 protein for better methanol utilization in yeast Komagataella phaffii
Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, 2023. urn:nbn:hr:159:905585
Kalogjera, Lara
Sveučilište u Zagrebu
Prehrambeno-biotehnološki fakultet
Zavod za biokemijsko inženjerstvo
Laboratorij za biokemijsko inženjerstvo, industrijsku mikrobiologiju i tehnologiju piva i slada

Institucijski repozitorij: Repozitorij Prehrambeno-biotehnološkog fakulteta u Zagrebu

Citirajte ovaj rad

Kalogjera, L. (2023). Semi-rational engineering of Adh2 protein for better methanol utilization in yeast Komagataella phaffii (Diplomski rad). Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet. Preuzeto s https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:905585

Kalogjera, Lara. "Semi-rational engineering of Adh2 protein for better methanol utilization in yeast Komagataella phaffii." Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, 2023. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:905585

Kalogjera, Lara. "Semi-rational engineering of Adh2 protein for better methanol utilization in yeast Komagataella phaffii." Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, 2023. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:905585

Kalogjera, L. (2023). 'Semi-rational engineering of Adh2 protein for better methanol utilization in yeast Komagataella phaffii', Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, citirano: 10.07.2024., https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:905585

Kalogjera L. Semi-rational engineering of Adh2 protein for better methanol utilization in yeast Komagataella phaffii [Diplomski rad]. Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet; 2023 [pristupljeno 10.07.2024.] Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:905585

L. Kalogjera, "Semi-rational engineering of Adh2 protein for better methanol utilization in yeast Komagataella phaffii", Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, Zagreb, 2023. Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:905585

Za citiranje koristite ovu mrežnu adresu: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:159:905585
Podaci o radu
NaslovSemi-rational engineering of Adh2 protein for better methanol utilization in yeast Komagataella phaffii
Naslov (hrvatski)Semi-racionalno inženjerstvo proteina Adh2 u svrhu bolje iskoristivosti metanola u kvascu Komagataella phaffii
AutorLara Kalogjera
MentorBožidar Šantek (mentor)
Član povjerenstvaBlaženka Kos (predsjednik povjerenstva)
Član povjerenstvaAndreja Leboš-Pavunc (član povjerenstva)
Ustanova koja je dodijelila
akademski / stručni stupanj		Sveučilište u Zagrebu
Prehrambeno-biotehnološki fakultet
(Zavod za biokemijsko inženjerstvo)
(Laboratorij za biokemijsko inženjerstvo, industrijsku mikrobiologiju i tehnologiju piva i slada)
Zagreb
Datum i država obrane2023-03-31, Hrvatska
Znanstveno / umjetničko
područje, polje i grana		BIOTEHNIČKE ZNANOSTI
Biotehnologija
Sažetak
The methylotrophic yeast Komagataella phaffii is commonly used as an expression system for recombinant protein production. In a recent study, it was demonstrated that the promiscuous activity of alcohol dehydrogenase 2 (Adh2) is responsible for the majority of methanol oxidation in K. phaffii in the absence of AOX genes. Methanol oxidation by Adh increases the amount of cellular energy (NADH) produced via the dissimilatory pathway. However, in the absence of AOX genes Adh2 is unable to support a growth phenotype on methanol. This thesis aimed to employ semi-rational engineering of the Adh2 protein to produce mutant variants with improved in vivo activity towards methanol. Saturation mutagenesis was performed on target sites (A52, G272, L119, S249, T123, and Y297), and the activity of the mutated ADH2 genes was determined through the in vivo production of eGfp under the FLD1 promoter. The screening results were beneficial for confirming the efficiency of the biosensor strain
Sažetak (hrvatski)
Metilotrofni kvasac Komagataella phaffii učestalo se koristi kao ekspresijski sustav za proizvodnju rekombinantnih proteina. U nedavnom istraživanju, demonstrirano je da je promiskuitetna aktivnost alkohol dehidrogenaze 2 (Adh2) odgovorna za većinu oksidacije metanola u odsutnosti AOX gena. Oksidacija metanola putem alkohol dehidrogenaza povećava količinu stanične energije (NADH) proizvedenu tijekom disimilatornog puta. Unatoč tome, u odsutnosti AOX gena, Adh2 ne može podržati rast kvasca na metanolu. U ovom radu, cilj je bio upotrijebiti semi-racionalno inženjerstvo proteina Adh2 kako bi se proizvele mutirane varijante s poboljšanom in vivo aktivnošću prema metanolu. Usmjerena mutageneza bila je provedena na ciljnim mjestima u genu (A52, G272, L119, S249, T123, and Y297) i aktivnost mutiranih ADH2 gena bila je određena in vivo produkcijom eGFP pod FLD1 promotorom. Rezultati protočne citometrije bili su korisni kako bi se potvrdila efikasnost biosenzora.
Ključne riječi
Ključne riječi (hrvatski)
Jezikengleski
URN:NBNurn:nbn:hr:159:905585
Studijski programNaziv: Molekularna biotehnologija
Vrsta studija: sveučilišni
Stupanj studija: diplomski
Akademski / stručni naziv: magistar/magistra inženjer/inženjerka molekularne biotehnologije (mag. ing. biotechn.)
Vrsta resursaTekst
Način izrade datotekeIzvorno digitalna
Prava pristupaOtvoreni pristup
Uvjeti korištenjaIkona licence Imenovanje-Bez prerada 4.0 međunarodna (CC BY-ND 4.0)
Datum i vrijeme pohrane2024-05-21 11:23:08