Cilj istraživanja U ovom radu dan je pregled tehnike dvodimenzionalna tekućinska kromatografija. Opisana je primjena dvodimenzionalne tekućinske kromatografije u identifikaciji onečišćenja u ljekovitim oblicima. Cilj rada bio je razviti metodu primjenom navedene tehnike za identifikaciju onečišćenja daptomicina u ljekovitim oblicima, a ista može biti primijenjena i za identifikaciju onečišćenja u aktivnoj farmaceutskoj tvari. Materijali/metode Za identifikaciju onečišćenja daptomicina korišten je dvodimenzionalni tekućinski kromatograf visoke djelotvornosti s analizatorom masa Agilent 1290 Infinity II povezanim s detektorom masa Q-TOF MS, model 6545 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, SAD). Analitička metoda korištena u prvoj dimenziji modificirana je prema literaturno dostupnim podacima kako bi se postiglo bolje razdvajanje kromatografskih pikova daptomicina i prisutnih onečišćenja. U drugoj dimenziji dužina i vrsta kolone, protok i gradijentni program su mijenjani sa svrhom poboljšanja selektivnosti metode. Parametri masenog spektrometra su optimirani direktnim unošenjem radnog standarda daptomicina koncentracije 0,2 mg/mL u instrument. Teorijska pozadina s naglaskom na aktivnu modulaciju i obrnutofaznu kromatografiju istražena je koristeći znanstvene izvore: PubMed, Science Direct. Rezultati 2D-LC/MS metoda razvijena je za identifikaciju onečišćenja daptomicina: lakton daptomicina, β-izomer daptomicina i anhidro-daptomicina. Kako bi se postigla prikladna selektivnost metode razvoj je započeo modifikacijom poznate metode koja je korištena u prvoj dimenziji. Razdvajanje analita provedeno je primjenom obrnutofazne kromatografske kolone (C8). Kromatografskim postupkom u prvoj dimenziji postignuto je zadovoljavajuće razdvajanje ispitanih onečišćenja te je druga dimenzija primijenjena za provjeru čistoće pikova onečišćenja. Za optimizaciju kromatografskog postupka u drugoj dimenziji korištene su također obrnutofazne kromatografske kolone (C18). Za „povezivanje“ dviju dimenzija korišten je prvo engl. multi heart cutting način rada. Međutim, utvrđeno je kako su svi „rezovi“ iz prve dimenzije bili „čisti“ odnosno nije došlo do preklapanja kromatografskih pikova osim u uzorku XEL540/02-17/032. Kako bi se utvrdila čistoća navedenog kromatografskog pika primijenjeno je uzorkovanje u visokoj rezoluciji (engl. High Resolution Sampling) odnosno engl. selective comprehensive 2D-LC način rada. Primjenom ovog načina rada potvrđeno je preklapanje pikova onečišćenja β-izomera daptomicina i drugih strukturno sličnih onečišćenja u uzorku XEL540/02-17/032. Masenom spektrometrijom potvrđen je identitet onečišćenja daptomicina: lakton daptomicina, β-izomer daptomicina i anhidro-daptomicin u tri ispitana ljekovita oblika. Zaključak Dvodimenzionalna tekućinska kromatografija je napredna instrumentalna tehnika kojom je moguće razdvojiti sastavnice složenih uzoraka, pogotovo kada je moguće u potpunosti primijeniti ortogonalnost u separacijskim koracima i spregnuti je s masenim detektorom kako bi dodatno identificirali analit ili dobili više informacija o strukturi same molekule.