prikaz prve stranice dokumenta Epigenetička manipulacija gena MGAT4A i MGAT5 upotrebom molekularnog alata VPR-dCas9 u modelnoj staničnoj liniji gušterače 1.1B4
  Preuzmi
PDF 19.27 MB
diplomski rad
Epigenetička manipulacija gena MGAT4A i MGAT5 upotrebom molekularnog alata VPR-dCas9 u modelnoj staničnoj liniji gušterače 1.1B4
Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet, 2022. urn:nbn:hr:217:058743
Lalić, Dora
Sveučilište u Zagrebu
Prirodoslovno-matematički fakultet
Biološki odsjek

Institucijski repozitorij: Repozitorij Prirodoslovno-matematičkog fakulteta

Citirajte ovaj rad

Lalić, D. (2022). Epigenetička manipulacija gena MGAT4A i MGAT5 upotrebom molekularnog alata VPR-dCas9 u modelnoj staničnoj liniji gušterače 1.1B4 (Diplomski rad). Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet. Preuzeto s https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:058743

Lalić, Dora. "Epigenetička manipulacija gena MGAT4A i MGAT5 upotrebom molekularnog alata VPR-dCas9 u modelnoj staničnoj liniji gušterače 1.1B4." Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet, 2022. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:058743

Lalić, Dora. "Epigenetička manipulacija gena MGAT4A i MGAT5 upotrebom molekularnog alata VPR-dCas9 u modelnoj staničnoj liniji gušterače 1.1B4." Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet, 2022. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:058743

Lalić, D. (2022). 'Epigenetička manipulacija gena MGAT4A i MGAT5 upotrebom molekularnog alata VPR-dCas9 u modelnoj staničnoj liniji gušterače 1.1B4', Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet, citirano: 18.12.2024., https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:058743

Lalić D. Epigenetička manipulacija gena MGAT4A i MGAT5 upotrebom molekularnog alata VPR-dCas9 u modelnoj staničnoj liniji gušterače 1.1B4 [Diplomski rad]. Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet; 2022 [pristupljeno 18.12.2024.] Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:058743

D. Lalić, "Epigenetička manipulacija gena MGAT4A i MGAT5 upotrebom molekularnog alata VPR-dCas9 u modelnoj staničnoj liniji gušterače 1.1B4", Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb, 2022. Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:058743

Za citiranje koristite ovu mrežnu adresu: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:058743
Podaci o radu
NaslovEpigenetička manipulacija gena MGAT4A i MGAT5 upotrebom molekularnog alata VPR-dCas9 u modelnoj staničnoj liniji gušterače 1.1B4
Naslov (engleski)Epigenetic manipulation of the MGAT4A and MGAT5 genes in pancreatic model cell line 1.1B4 using VPR-dCas9 molecular tool
AutorDora Lalić
MentorVlatka Zoldoš (mentor)
Član povjerenstvaVlatka Zoldoš (predsjednik povjerenstva)
Član povjerenstvaTomislav Ivanković (član povjerenstva)
Član povjerenstvaJasna Lajtner (član povjerenstva)
Član povjerenstvaŽeljka Vidaković-Cifrek (član povjerenstva)
Ustanova koja je dodijelila
akademski / stručni stupanj		Sveučilište u Zagrebu
Prirodoslovno-matematički fakultet
(Biološki odsjek)
Zagreb
Datum i država obrane2022-10-27, Hrvatska
Znanstveno / umjetničko
područje, polje i grana		PRIRODNE ZNANOSTI
Biologija
Sažetak
Transporteri GLUT (engl. Glucose Transporter) nalaze se na membranama beta-stanica gušterače te su odgovorni za unos glukoze iz krvotoka, što u konačnici dovodi do ispuštanja inzulina koji regulira razinu glukoze u krvi. U miševa je dokazano da nedostatak glikoziltransferaza GnT-4a i GnT-V, kodiranih genima MGAT4A i MGAT5, uzrokuje nepravilnu glikozilaciju transportera GLUT i smanjenje njihove količine u membranama, što posljedično dovodi do razvitka dijabetesa tipa 2. Čini se da isti mehanizam postoji i u ljudima, ali mreža molekularnih događaja uključenih u nepravilnu regulaciju glikoproteina GLUT nije još razjašnjena. U ovom je istraživanju ciljano povećana ekspresija gena MGAT4A i MGAT5 pomoću molekularnog sustava CRISPR/dCas9 koji na sebe ima fuzioniranu aktivacijsku domenu VPR kako bi se ispitao učinak na količinu i lokalizaciju transportera GLUT1 u stanicama 1.1B4, koje su model za ljudske beta-stanice gušterače. Ekspresija gena uspješno je povećana na razini transkripcije te je potvrđena reverznom transkripcijom i lančanom reakcijom polimeraze u stvarnom vremenu (qPCR). Metodom Western blot analizirana je količina proteina GnT-4a i GnTV te je uočen porast količine koji nije statistički značajan. Imunofluorescencijskim bojanjem analizirana je količina i lokalizacija transportera GLUT1 te je uočen gotovo dupli porast u količini transportera između tretiranih i kontrolnih stanica. Kako bi se istražilo na koji je način povećana količina enzima utjecala na povećanje količine transportera GLUT1, trebalo bi analizirati glikanski profil transportera.
Sažetak (engleski)
GLUT transporters (Glucose Transporters), localized in membranes of pancreatic beta cells, are responsible for uptake of glucose from the bloodstream. That leads to release of insulin which regulates blood sugar level. It has been proven in mice that the absence of glycosytransferases GnT-4a and GnT-V, encoded by genes MGAT4A and MGAT5, leads to improper glycosylation of GLUT transporters and a decrease in their abundance, which leads to development of type 2 diabetes. It appears the same mechanism exists in people, however the network of exact molecular events that lead to impaired glycosylation of GLUT transporters has not yet been resolved. In this study, expression of genes MGAT4A and MGAT5 was upregulated using a CRISPR/dCas9 system to which an activating VPR domain was fused. Cell line 1.1B4 was used, which is a model cell line for human pancreatic beta cells, so the effect on GLUT transporters could be investigated. Gene upregulation was confirmed on a transcription level by reverse transcription and quantitative polymerase chain reaction (qPCR). Protein analysis was done by Western blot and an increase in protein quantity was observed, but it was statistically unsignificant. Imunofluorescent staining was used to analyse the quantity and localization of GLUTs. Treated cells had almost double the quantity of GLUTs compared to the control group. To investigate the mechanism by which elevated levels of GnT-4a and GnT-V affected on GLUT quantity, glycan profile of transporters would have to be analysed.
Ključne riječi
Ključne riječi (engleski)
Jezikhrvatski
URN:NBNurn:nbn:hr:217:058743
Studijski programNaziv: Molekularna biologija
Vrsta studija: sveučilišni
Stupanj studija: diplomski
Akademski / stručni naziv: magistar/magistra molekularne biologije (mag. biol. mol.)
Vrsta resursaTekst
Način izrade datotekeIzvorno digitalna
Prava pristupaOtvoreni pristup
Uvjeti korištenjaIkona licence Zaštićeno autorskim pravom.
Datum i vrijeme pohrane2022-11-17 11:31:11