Naslov Promjena ekspresije metionin sulfoksid reduktaze B3 u uzorcima bubrega štakora u ovisnosti o dobi i spolu
Naslov (engleski) Change in the expression of methionine sulfoxide reductase B3 in rat kidney samples depending on age and sex
Autor Ana Sever
Mentor Marija Ljubojević (mentor)
Mentor Domagoj Đikić (komentor)
Član povjerenstva Domagoj Đikić (predsjednik povjerenstva)
Član povjerenstva Duje Lisičić (član povjerenstva)
Član povjerenstva Dubravka Hranilović (član povjerenstva)
Član povjerenstva Marija Ivković (član povjerenstva)
Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj Sveučilište u Zagrebu Prirodoslovno-matematički fakultet (Biološki odsjek) Zagreb
Datum i država obrane 2024-02-27, Hrvatska
Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana PRIRODNE ZNANOSTI Biologija
Sažetak Oksidativni stres predstavlja stanje narušene oksido-redukcijske ravnoteže unutar stanice uzrokovano neravnotežom nastajanja i uklanjanja reaktivnih vrsta kisika (ROS). U fiziološkim uvjetima ROS predstavlja važnu kariku u održavanju života stanice, dok su povišene koncentracije ROS jedan od preduvjeta starenja jer se narušava integritet svih makromolekula. Senescencija ili starenje nastupa nakon oštećenja kao stanje postupnog neuravnoteženja staničnih fizioloških i metaboličkih funkcija. Stanica ulazi u senescenciju poglavito zbog oštećenja molekule DNA koja se, ako nisu pretjerana, popravljaju. Inače, pokreću se mehanizmi stanične smrti. Djelovanjem ROS dolazi do oksidacije aminokiseline metionina (Met, M), koja sadrži sumpor, unutar proteina. Oksidacijom Met nastaje spoj metionin sulfoksid (MetO) u dva epimera – S i R, koje reduciraju enzimi članovi obitelji metionin sulfoksid reduktaze (Msr), MsrA i MsrB. Stereospecifičnost uzrokuje da MsrA reducira S-epimer, a MsrB R-epimer MetO. Cilj ovog rada bio je utvrditi postoje li dobne i spolne razlike analogne promjenama ekspresije metalotioneina koji dominira u ženkama, raste starenjem i koji je potencijalno uključen u regeneraciju MsrB3. Na nivou ekspresije enzima MsrB3 u bubrezima štakora odredili smo ciljanu mRNA RT-PCR tehnikom, prisutnost proteina u tkivnim homogenatima western blot analizom te raspodjelu proteina u tkivnim narescima metodom imunofluorescencije. Granične pozitivne spolne razlike u korist ženki na razini nukleinskih kiselina potvrđene su i western blot analizom. Izrazito snažan intenzitet vakuoliziranog imunofluorescencijskog obojenja u mužjaka unio je nedosljednost u rezultate te zahtjeva provjeru samog protutijela do konačne interpretacije dobivenih rezultata, koji su suprotni od očekivanih i za sada ne potvrđuju povezanost promjena ekspresije metalotioneina sa MsrB3 enzimom u bubrezima.
Sažetak (engleski) Oxidative stress is a state of an altered redox balance caused by unequal production and depletion of reactive molecular species. In physiological conditions, reactive oxygen species (ROS) serve as important signaling molecules and are involved in cell viability. When their concentration is heightened, they are considered to be the main drivers of the aging process due to their ability to disrupt the integrity of all macromolecules. Senescence or aging is a state in which a cell progressively falls into metabolic and physiological disbalance caused by extensive damage to its components. A cell usually enters senescence due to irreparable DNA damage. If the damage is not extensive, the cell is subjected to repair. Otherwise, the damage will lead to the activation of mechanisms involved in cell death. The effect of ROS molecules on proteins is observed through the sulfur-containing amino acid methionine (Met, M), which is readily oxidized in said conditions. Methionine sulfoxide (MetO) is present in two epimers - S and R. The two epimers are reduced by enzymes, part of the methionine sulfoxide reductase (Msr) family, Msr A and Msr B. Because of stereospecificity, MsrA reduces the S-epimer while MsrB reduces the R-epimer of MetO. The main goal of this master's thesis was to elucidate the existence of possible sex and age differences consistent with the changes found in methalotionein expression. Methalotionein expression is dominant in females, heightens with age and is potentially involved in MsrB3 regeneration. On the basis of MsrB3 expression in rat kidneys, we produced the target mRNA using the RT-PCR method, established the presence of proteins in tissue homogenates with western blot analysis and the overall distribution of proteins in tissue samples via imunnofluorescent staining. Borderline positive differences were confirmed in females following the nucleic acid analysis and western blot analysis, but the immunofluorescent staining produced inconsistent results with intense vacuolar staining in males, so antibody specificity has to be reviewed.. The final results were contrary to the ones expected and at present do not confirm the correlation between metalothionein and MsrB3 expression in the kidneys.
Ključne riječi
MsrB3
metalotionein
oksidativni stres
bubreg
senescencija
Ključne riječi (engleski)
MsrB3
metallothionein
oxidative stress
kidney
senescence
Jezik hrvatski
URN:NBN urn:nbn:hr:217:209045
Projekt Šifra: IP-2013-11-1481 Naziv: Starosno-ovisna ekspresija membranskih prijenosnika u štakora Kratica: AGEMETAR Voditelj: Ivan Sabolić Pravna nadležnost: Hrvatska Financijer: HRZZ Linija financiranja: IP
Projekt Šifra: 533-03-23-0006 Naziv: Procjena učinkovitosti i toksičnosti biološki aktivnih tvari Kratica: BioMolTox Voditelj: Nikolina Maček Hrvat Pravna nadležnost: Hrvatska Financijer: Europska unija Linija financiranja: EU sljedeće generacije (Next Generation EU; NGEU)
Projekt Šifra: KK.01.1.1.02.0007 Naziv: Istraživačko-edukacijski centar za zdravstvenu i medicinsku ekologiju i zaštitu od zračenja – Rekonstrukcija i dogradnja Instituta za medicinska istraživanja i medicinu rada u Zagrebu Kratica: ReC-IMI Voditelj: Ana Lucić Vrdoljak Pravna nadležnost: Hrvatska Financijer: Europska unija Linija financiranja: Europski fond za regionalni razvoj (EFRR)
Studijski program Naziv: Eksperimentalna biologija Vrsta studija: sveučilišni Stupanj studija: diplomski Akademski / stručni naziv: sveučilišni/a magistar/magistra eksperimentalne biologije (univ. mag. biol. exp.)
Vrsta resursa Tekst
Način izrade datoteke Izvorno digitalna
Prava pristupa Otvoreni pristup
Uvjeti korištenja
Datum i vrijeme pohrane 2024-03-13 12:02:19