prikaz prve stranice dokumenta Podjedinica H arhejske RNA-polimeraze: od kloniranja do istraživanja interakcije s atipičnom seril-tRNA-sintetazom
  Preuzmi
PDF 1.38 MB
diplomski rad
Podjedinica H arhejske RNA-polimeraze: od kloniranja do istraživanja interakcije s atipičnom seril-tRNA-sintetazom
Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet, 2011. urn:nbn:hr:217:026522
Marasović, Mirela
Sveučilište u Zagrebu
Prirodoslovno-matematički fakultet
Biološki odsjek

Institucijski repozitorij: Repozitorij Prirodoslovno-matematičkog fakulteta

Citirajte ovaj rad

Marasović, M. (2011). Podjedinica H arhejske RNA-polimeraze: od kloniranja do istraživanja interakcije s atipičnom seril-tRNA-sintetazom (Diplomski rad). Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet. Preuzeto s https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:026522

Marasović, Mirela. "Podjedinica H arhejske RNA-polimeraze: od kloniranja do istraživanja interakcije s atipičnom seril-tRNA-sintetazom." Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet, 2011. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:026522

Marasović, Mirela. "Podjedinica H arhejske RNA-polimeraze: od kloniranja do istraživanja interakcije s atipičnom seril-tRNA-sintetazom." Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet, 2011. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:026522

Marasović, M. (2011). 'Podjedinica H arhejske RNA-polimeraze: od kloniranja do istraživanja interakcije s atipičnom seril-tRNA-sintetazom', Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet, citirano: 22.11.2024., https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:026522

Marasović M. Podjedinica H arhejske RNA-polimeraze: od kloniranja do istraživanja interakcije s atipičnom seril-tRNA-sintetazom [Diplomski rad]. Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet; 2011 [pristupljeno 22.11.2024.] Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:026522

M. Marasović, "Podjedinica H arhejske RNA-polimeraze: od kloniranja do istraživanja interakcije s atipičnom seril-tRNA-sintetazom", Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb, 2011. Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:026522

Za citiranje koristite ovu mrežnu adresu: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:026522
Podaci o radu
NaslovPodjedinica H arhejske RNA-polimeraze: od kloniranja do istraživanja interakcije s atipičnom seril-tRNA-sintetazom
Naslov (engleski)Archaeal RNA polymerase subunit H: from cloning to investigation of interaction with atypical seryl-tRNA synthetase
AutorMirela Marasović
MentorIvana Weygand-Đurašević (mentor)
Član povjerenstvaIvana Weygand-Đurašević (predsjednik povjerenstva)
Član povjerenstvaŽeljka Vidaković Cifrek (član povjerenstva)
Član povjerenstvaIvana Ivančić Baće (član povjerenstva)
Ustanova koja je dodijelila
akademski / stručni stupanj		Sveučilište u Zagrebu
Prirodoslovno-matematički fakultet
(Biološki odsjek)
Zagreb
Datum i država obrane2011, Hrvatska
Znanstveno / umjetničko
područje, polje i grana		PRIRODNE ZNANOSTI
Biologija
Sažetak
Interakcija podjedinice H arhejske RNA-polimeraze (RpoH) i seril-tRNA-sintetaze metanogenog tipa iz arheje Methanothermobacter thermautotrophicus (MtSerRS) detektirana je ranije u laboratoriju sustavom dvaju hibrida. Asocijacija MtSerRS:RpoH vrlo je zanimljiva budući da se radi o proteinima uključenim u proces koji je od vitalne važnosti za život stanice – ekspresiju gena. Funkcija arhejske RNA-polimeraze je transkripcija svih gena, dok MtSerRS aminoacilira tRNASer serinom te na taj način opskrbljuje ribosom supstratima za elongacijsku fazu translacije. U svrhu potvrde stvaranja kompleksa MtSerRS:RpoH tehnikama in vitro, bilo je potrebno pročistiti pojedine proteine u dovoljnim količinama. Zato je gen rpoH umnožen lančanom reakcijom polimeraze i ugrađen u vektor pod kontrolom jakog T7 promotora. Optimiran je sustav za prekomjernu ekspresiju i pročišćavanje RpoH iz bakterije E.coli, a zatim je RpoH pročišćen u preparativnoj količini. Također, prekomjerno je eksprimirana i pročišćena MtSerRS. Interakcija dvaju proteina istražena je gel-retardacijskom elektroforezom i supročišćavanjem kompleksa na koloni. Preliminarni rezultati dali su naznaku stvaranja kompleksa na nativnom gelu, međutim supročišćavanjem kompleksa na koloni asocijacija MtSerRS:RpoH nije detektirana.
Sažetak (engleski)
A yeast two hybrid screen performed earlier in our laboratory revealed interaction of Archaeal RNA polymerase subunit H (RpoH) and methanogenic-type seryl-tRNA synthetase from Archaea Methanothermobacter thermautotrophicus (MtSerRS). Association MtSerRS:RpoH is very interesting since both proteins are involved in a process vital for cell's life – expression of genes. Archaeal RNA polymerase transcribes genes while MtSerRS aminoacylates tRNASer with serine and supplies ribosome with substrates for elongation phase of translation. In order to confirm the formation of MtSerRS:RpoH complex by in vitro methods, it was nessesary to obtain the individual proteins in sufficient amounts. Therefore, rpoH gene was amplified using PCR and cloned in a vector under control of T7 strong promoter. The system for overexpression and purification of RpoH in Escherichia coli was oprimized, and then RpoH was purified for preparative purposes. Also, MtSerRS was overexpressed and purified. The interaction between two proteins was investigated by gel-retardation electrophoresis and pull-down assay. Preliminary results indicate complex formation on native gel, but the association MtSerRS:RpoH was not detected by pull-down assay.
Ključne riječi
Ključne riječi (engleski)
Jezikhrvatski
URN:NBNurn:nbn:hr:217:026522
Studijski programNaziv: Diplomirani inženjer biologije; smjerovi: Molekularna biologija
Smjer: Molekularna biologija
Vrsta studija: sveučilišni
Stupanj studija: dodiplomski
Akademski / stručni naziv: magistar/magistra biologije (mag. biol.)
Vrsta resursaTekst
Način izrade datotekeIzvorno digitalna
Prava pristupaOtvoreni pristup
Uvjeti korištenjaIkona licence Zaštićeno autorskim pravom.
Datum i vrijeme pohrane2018-04-09 08:44:44