prikaz prve stranice dokumenta Sortiranje genetički modificiranih stanica FreeStyle 293-F pomoću magnetnih kuglica konjugiranih sa streptavidinom
  Preuzmi
PDF 1007.38 KB
diplomski rad
Sortiranje genetički modificiranih stanica FreeStyle 293-F pomoću magnetnih kuglica konjugiranih sa streptavidinom
Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet, 2019. urn:nbn:hr:217:401907
Franić, Dina
Sveučilište u Zagrebu
Prirodoslovno-matematički fakultet
Biološki odsjek

Institucijski repozitorij: Repozitorij Prirodoslovno-matematičkog fakulteta

Citirajte ovaj rad

Franić, D. (2019). Sortiranje genetički modificiranih stanica FreeStyle 293-F pomoću magnetnih kuglica konjugiranih sa streptavidinom (Diplomski rad). Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet. Preuzeto s https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:401907

Franić, Dina. "Sortiranje genetički modificiranih stanica FreeStyle 293-F pomoću magnetnih kuglica konjugiranih sa streptavidinom." Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet, 2019. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:401907

Franić, Dina. "Sortiranje genetički modificiranih stanica FreeStyle 293-F pomoću magnetnih kuglica konjugiranih sa streptavidinom." Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet, 2019. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:401907

Franić, D. (2019). 'Sortiranje genetički modificiranih stanica FreeStyle 293-F pomoću magnetnih kuglica konjugiranih sa streptavidinom', Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet, citirano: 22.11.2024., https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:401907

Franić D. Sortiranje genetički modificiranih stanica FreeStyle 293-F pomoću magnetnih kuglica konjugiranih sa streptavidinom [Diplomski rad]. Zagreb: Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet; 2019 [pristupljeno 22.11.2024.] Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:401907

D. Franić, "Sortiranje genetički modificiranih stanica FreeStyle 293-F pomoću magnetnih kuglica konjugiranih sa streptavidinom", Diplomski rad, Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb, 2019. Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:401907

Za citiranje koristite ovu mrežnu adresu: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:401907
Podaci o radu
NaslovSortiranje genetički modificiranih stanica FreeStyle 293-F pomoću magnetnih kuglica konjugiranih sa streptavidinom
Naslov (engleski)Sorting genetically modified FreeStyle 293-F cells with streptavidin-conjugated magnetic beads
AutorDina Franić
MentorAleksandar Vojta (mentor)
Član povjerenstvaAleksandar Vojta (predsjednik povjerenstva)
Član povjerenstvaSofia Ana Blažević (član povjerenstva)
Član povjerenstvaDamjan Franjević (član povjerenstva)
Član povjerenstvaVlatka Zoldoš (član povjerenstva)
Ustanova koja je dodijelila
akademski / stručni stupanj		Sveučilište u Zagrebu
Prirodoslovno-matematički fakultet
(Biološki odsjek)
Zagreb
Datum i država obrane2019-06-27, Hrvatska
Znanstveno / umjetničko
područje, polje i grana		PRIRODNE ZNANOSTI
Biologija
Sažetak
ciljem unapređenja sortiranja genetički promijenjenih stanica nedavno je razvijena varijanta sortiranja pomoću magneta. Ona zahtjeva da vektor za genetičku manipulaciju stanica kodira za rekombinantni protein SBP-ΔLNGFR (od engl. Streptavidin Binding Peptide - Low Affinity Nerve Growth Factor Receptor) koji nakon ekspresije lokalizira na membranama stanica. Njegov streptavidin vezujući dio (SBP) tada se usmjerava u izvanstaničan prostor te snažno veže streptavidin na magnetnim kuglicama kojima se vrši separacija stanica. Cilj ovog rada bio je sortirati transfeciranu populaciju stanica FreeStyle 293-F opisanom metodom. Konstruirana su dva donorska plazmida, jedan s modulom SBP-ΔLNGFR, a drugi s mRuby3. Metodom Golden Gate kloniranja, oni su zajedno s modulima dCas9-DNMT3A i gRNA sastavljeni u plazmide kojima su transfecirane stanice. Uspješna transfekcija zabilježena je u 14.5% stanica detekcijom mRuby3 proteina. Metodom imunofluorescencije 24 sata nakon transfekcije potvrđena je lokalizacija SBP-ΔLNGFR na membranama stanica, dok nakon 48 i 72 sata njegova prisutnost više nije zabilježena. Stanice su sortirane prema protokolu Miltenyi Biotec: 24, 48 i 72 sata nakon transfekcije, no pozitivan ishod je izostao. Postupak je ponovljen variranjem nekoliko novih uvjeta separacije no također bezuspješno. S obzirom na negativan ishod sortiranja u raspravi rada predlažemo isprobati nove uvjete istog protokola kao i alternativan protokol s magnetnim kuglicama drugog proizvođača.
Sažetak (engleski)
With the aim of improving genetically modified cell sorting, a variant of magnetic cell sorting has recently been developed. It requires that the vector for genetical manipulation of cells encode for the recombinant protein SBP-ΔLNGFR which is localized on the cell membrane. The protein's streptavidin binding site (SBP) is then directed to the extracellular space where it strongly binds streptavidin on the magnetic particles for cellular separation. The purpose of this paper was to sort transfected FreeStyle 293-F cells by the described method. Two donor plasmids were constructed, one with module SBP-ΔLNGFR and the other with mRuby3. By the Golden Gate cloning, they were assembled with dCas9-DNMT3A and gRNA into plasmids for transfection. Successful transfection was observed in 14.5% cells by detection of the mRuby3 protein. Twenty-four hours after transfection, the SBP-ΔLNGFR localization on cell membranes was confirmed by immunofluorescence, while after 48 and 72 hours its presence was not recorded anymore. Cells were sorted by Miltenyi Biotec protocol: 24, 48 and 72 hours after transfection but without positive outcome. The procedure was repeated by varying several other conditions but also without improvement. We propose to try out new conditions for cell separation of the same protocol as well as an alternative protocol with magnetic particles of another manufacturer.
Ključne riječi
Ključne riječi (engleski)
Jezikhrvatski
URN:NBNurn:nbn:hr:217:401907
Studijski programNaziv: Molekularna biologija
Vrsta studija: sveučilišni
Stupanj studija: diplomski
Akademski / stručni naziv: magistar/magistra molekularne biologije (mag. biol. mol.)
Vrsta resursaTekst
Način izrade datotekeIzvorno digitalna
Prava pristupaOtvoreni pristup
Uvjeti korištenjaIkona licence Zaštićeno autorskim pravom.
Datum i vrijeme pohrane2019-10-25 07:26:30